[发明专利]鸡传染性支气管炎病毒5b ELISA抗体检测试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种鸡传染性支气管炎ELISA抗体检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒含有IBV非结构蛋白5b包被的ELISA反应板;

还包括：

酶标试剂；

封闭液；

制备所述ELISA反应板所用的包被液是pH为9.6的0.05M 碳酸盐缓冲液；

所述的酶标试剂为辣根过氧化物酶标记的羊抗鸡IgG抗体；

所述封闭液为含5%脱脂奶粉的PBS；

所述的IBV非结构蛋白5b的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示；所述的IBV非结构蛋白5b的氨基酸序列如SEQIDNO.2所示。

2.根据权利要求1所述试剂盒，其特征在于，所述的IBV非结构蛋白5b是通过重组表达产生的。

3.根据权利要求2所述试剂盒，其特征在于，IBV非结构蛋白5b重组表达的方法如下：

S1.RT-PCR扩增IBV 5b基因；

S2.将步骤S1所得基因整合到质粒载体中，获得重组质粒；

S3.将步骤S2所构建的重组质粒转化到宿主菌中并诱导表达，获得菌液；

S4.筛选携带IBV 5b基因的重组菌，在IPTG诱导下大量表达与HIS融合的5b重组蛋白；

S5.利用HIS标签镍柱亲和层析柱纯化，获得提纯后的IBV 5b重组蛋白。

4.根据权利要求3所述试剂盒，其特征在于，

步骤S1中，扩增IBV 5b基因的引物对如SEQIDNO.3和SEQIDNO.4所示；

步骤S2中，所述的质粒载体为pET-32a；

步骤S3中，所述的宿主菌为大肠杆菌。

5.根据权利要求1所述试剂盒，其特征在于，还包括：

洗涤液；

稀释液；

阳性对照样品；

阴性对照样品；

显色液；

终止液。

6.根据权利要求5所述试剂盒，其特征在于，

所述的洗涤液为含0 .05％Tween-20的PBS；

所述的稀释液为含5%脱脂奶粉的PBST；

所述的阳性对照样品为抗IBV 5b鸡血清；

所述的阴性对照样品为阴性SPF鸡血清；

所述的显色液为TMB 单组分显色液；

所述的终止液为2 M H₂SO₄。