[发明专利]一种总胆汁酸检测试剂盒

说明书

本发明涉及体外诊断试剂检测技术领域，具体涉及一种总胆汁酸检测试剂盒，包括试剂R1和试剂R2，试剂R1包括缓冲液、表面活性剂、防腐剂、等渗调节剂和Thio‑NAD；试剂R2包括缓冲液、表面活性剂、稳定剂、防腐剂、还原型辅酶I和3α‑羟基类固醇脱氢酶，试剂R1中的缓冲液为甘氨酸缓冲液、柠檬酸‑柠檬酸钠缓冲液、邻苯二甲酸氢钾‑氢氧化钠缓冲液、PBS缓冲液等；试剂R1中的等渗调节剂为NaCl、KCl、MgCl₂中的一种或多种；试剂R2中的稳定剂为TEA、BSA、TCEP、谷胱甘肽、甘露醇等。利用本发明的试剂盒在测定特殊样本的总胆汁酸时，可改善反应曲线，而且长时间放置稳定性良好。

技术领域

本发明涉及体外诊断试剂检测技术领域，具体涉及一种总胆汁酸检测试剂盒。

背景技术

胆汁酸是胆汁的重要成分，在脂肪代谢中起着重要作用,胆汁酸主要存在于肠肝循环系统并通过再循环起一定的保护作用,只有一少部分胆汁酸进入外围循环,促进胆汁酸肠肝循环的动力是肝细胞的转运系统，吸收胆汁酸并将其分泌入胆汁、缩胆囊素诱导的胆囊收缩、小肠的推进蠕动，回肠黏膜的主动运输及血液向门静脉的流入。

总胆汁酸(TBA)是一系列物质的总称，具体包括胆酸(CA)、鹅脱氧胆酸(CDCA)和代谢中产生的脱氧胆酸(DCA)还有少量石胆酸(LCA)和微量熊脱氧胆酸(UDCA)。人体血清总胆汁酸(TBA)是由肝脏合成并分解代谢，从而维持人体胆汁酸的相对稳定，它的调控是肝脏的一个主要功能。当肝细胞发生病变或患胆管疾病时可引起胆汁的代谢障碍，使进入血中的胆汁酸含量显著升高，血清TBA升高与肝细胞损伤程度成正比。

目前市售的总胆汁酸检测试剂盒主要采用酶循环法。其反应原理是利用3α-HSD和硫代氧化型辅酶(Thio-NAD)特异性氧化胆汁酸，生成3-酮类固醇和还原性硫代氧化型辅酶(Thio-NADH)；然后在3α-HSD存在的条件下，3-酮类固醇和还原型辅酶Ⅰ(NADH)又生成胆汁酸和氧化型辅酶(NAD)，每一次循环比原来的反应提高一倍的灵敏度，如此往复循环，从而放大微量的胆汁酸，产生大量的硫代还原型辅酶Ⅰ(Thio-NADH)，最后通过测定生成的Thio-NADH的吸光度变化，测得胆汁酸的含量。

然而本公司实验室通过大量不同厂家试剂的对比实验发现，基于该反应原理的总胆汁酸检测试剂盒在样本检测时也存在一定弊端：(1)试剂在检测某些特殊样本(尤其是低龄儿童血清或血浆)时，试剂R1会和样本发生反应，造成反应曲线漂移，从而使得空白吸光度上升，造成检测结果异常；(2)随着试剂放置时间的延长，试剂的检测灵敏度会降低，使因数K值升高，造成试剂的检测稳定性下降。因此研究开发一种反应曲线更好、稳定度更高的总胆汁酸检测试剂盒显得尤为重要。

发明内容

本发明的目的在于是：针对现有技术存在的不足，提供一种反应曲线更好、稳定度更高的总胆汁酸检测试剂盒，该检测试剂盒在检测特殊样本时反应曲线波动小，并且长时间放置稳定性良好。

为了实现上述目的，本发明的技术方案是：

一种总胆汁酸检测试剂盒，所述试剂盒包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1包括缓冲液、表面活性剂、防腐剂、等渗调节剂和Thio-NAD；所述试剂R2包括缓冲液、表面活性剂、稳定剂、防腐剂、还原型辅酶I和3α-羟基类固醇脱氢酶，其特征在于：

所述试剂R1中的缓冲液为甘氨酸缓冲液、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液、邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钠缓冲液、PBS缓冲液、GOOD’S缓冲液中的一种或多种，且所述缓冲液的pH为3.0-6.6；

所述试剂R1中的等渗调节剂为NaCl、KCl、MgCl₂中的一种或多种；

所述试剂R2中的稳定剂为TEA、BSA、TCEP、谷胱甘肽、甘露醇、海藻糖、蔗糖中的多种。

作为一种优选的技术方案，所述试剂R2中的稳定剂为BSA、TCEP和谷胱甘肽。