[发明专利]CRISPR/Cas9技术介导山羊VEGF基因定点整合的方法在审
| 申请号： | 201810266144.X | 申请日： | 2018-03-29 |
| 公开（公告）号： | CN108424931A | 公开（公告）日： | 2018-08-21 |
| 发明（设计）人： | 呼啸;刘东军;郝斐;高源;梁浩 | 申请（专利权）人： | 内蒙古大学 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/90;C12N15/877;C12N5/10;A01K67/027 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 010021 内蒙古自*** | 国省代码： | 内蒙古;15 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 山羊 定点整合 打靶载体 表达载体 细胞株 构建 介导 胎儿成纤维细胞 筛选标记基因 转基因动物 基因靶向 基因功能 基因序列 遗传育种 敲除 位点 转染 筛选 优化 安全 研究 | ||
1.CRISPR/Cas9技术介导山羊VEGF基因定点整合的方法，其特征在于，其是根据山羊的FGF5基因序列，构建基于CRISPER/Cas9系统的Cas9-gRNA表达载体和VEGF打靶载体，然后将优化后的然后将优化后的Cas9-gRNA表达载体及VEGF打靶载体共同转染至山羊胎儿成纤维细胞中，获得VEGF基因在FGF5位点定点整合的细胞株。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，靶位点在FGF5基因的第1外显子上。
3.根 据 权 利 要 求 2 所 述 的 方 法，其 特 征 在 于， s g R N A靶 序 列 为5 ′ - agcccctcggggcgccggac-3′。
4.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于，所述山羊包括阿尔巴斯绒山羊。
5.根据权利要求1-4任一项所述的方法，其特征在于，所述CRISPER/Cas9系统中Cas9-gRNA表达载体的序列如SEQ ID NO:1所示。
6.根据权利要求1-5任一项所述方法获得的山羊VEGF基因定点整合的细胞株。
7.根据权利要求1-6任一项所述方法在生产VEGF基因定点整合的克隆山羊中的应用。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，以权利要求6所述山羊VEGF基因定点整合的细胞为核移植供体细胞，离体的山羊卵母细胞为核移植受体细胞，通过核移植技术获得山羊克隆胚胎，然后将克隆胚胎通过胚胎移植技术移入山羊子宫内妊娠，获得VEGF基因在FGF5位点定点整合的山羊。
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