[发明专利]粪便宿主DNA甲基化检测方法

权利要求书

1.一种提取粪便中宿主DNA的试剂组合物，其特征在于，包括：

提供硫酸根离子的裂解液A；以及

提供钙离子的絮凝剂。

2.根据权利要求1所述的试剂组合物，其特征在于，所述裂解液A中含有硫酸铵，所述絮凝剂为氯化钙溶液；

任选地，所述裂解液A包括：硫酸铵、硫氰酸胍、Tris-HCl、EDTA、CTAB和PVP-10，所述絮凝剂为0.5～2M的氯化钙溶液；

优选地，所述裂解液A包括：

25～500mM的硫酸铵；

25～500mM的硫氰酸胍；

10～100mM的Tris-HCl，pH为5-8；

20～200mM的EDTA，pH为8.0；

0.5～2.5质量％的CTAB；以及

0.5～2.5质量％的PVP-10；

所述絮凝剂为0.5～1M的氯化钙溶液；

更优选地，所述裂解液A包括：

50～100mM的硫酸铵；

50～100mM的硫氰酸胍；

20～50mM的Tris-HCl，pH为6.5-7.5；

40～50mM的EDTA，pH为8.0；

1.5～2.0质量％的CTAB；以及

1.5～2.0质量％的PVP-10。

3.根据权利要求1所述的试剂组合物，其特征在于，进一步包括：

裂解液B、蛋白消化液、结合液、DNA吸附载体、去杂质液A、去杂质液B和DNA溶解液；

任选地，所述裂解液B包括：硫氰酸胍、Tris-HCl和Triton X-100；

所述蛋白消化液为蛋白酶K溶液；

所述结合液为无水乙醇；

所述DNA吸附载体为硅羟基磁珠；

所述去杂质液A包括：硫氰酸胍、乙酸铵、Triton X-100、Tris-HCl和乙醇；

所述去杂质液B包括：乙酸铵、Tris-HCl和乙醇；

所述DNA溶解液为Tris-HCl；

优选地，

所述裂解液B包括：2～6M的硫氰酸胍；10～100mM的Tris-HCl，pH为5～8以及0.1～5质量％的Triton X-100；

所述蛋白消化液为10～50mg/ml的蛋白酶K溶液；

所述去杂质液A包括：1～2M的硫氰酸胍；20～200mM的乙酸铵；0.1～0.5质量％的Triton X-100；10～100mM的Tris-HCl，pH6～8以及40～70质量％的乙醇；

所述去杂质液B包括：5～50mM的乙酸铵溶液；5～50mM的Tris-HCl，pH6～8以及60～90质量％的乙醇；

所述DNA溶解液为5～25mM的Tris-HCl，pH8～9；

更优选地，

所述裂解液B包括：3.5～4.5M的硫氰酸胍；20～50mM的Tris-HCl，pH为5.5～6.5以及0.5～1质量％的Triton X-100；

所述蛋白消化液为15～25mg/ml的蛋白酶K溶液；

所述去杂质液A包括：2M的硫氰酸胍；25～50mM的乙酸铵；0.2～0.25质量％的TritonX-100；15～25mM的Tris-HCl，pH为6.8以及45～60质量％乙醇；

所述去杂质液B包括：10mM的乙酸铵、10mM的Tris-HCl，pH为6.8以及70～80质量％乙醇；

所述DNA溶解液为10mM的Tris-HCl，pH为8.5。