[发明专利]一种区分水牛和奶牛奶的miRNA标记物及其应用

权利要求书

1.一种区分水牛和奶牛奶的miRNA标记物在区分水牛和奶牛奶中的应用，其特征在于：

所述的miRNA标记物为miR-2285t，其序列如SEQ ID NO：1所示；

所述的水牛为摩拉水牛；所述的奶牛为荷斯坦奶牛。

2.一种如权利要求1中所述的miRNA标志物的检测引物在区分水牛和奶牛奶中的应用，其特征在于：该检测引物为：

miR-2285t的上游引物序列为：5′-ggccagaatctggatga-3′；

miR-2285t的下游引物序列为：5′-gtgcagggtccgaggt-3′；

所述的水牛为摩拉水牛；所述的奶牛为荷斯坦奶牛。

3.一种用于区分水牛和奶牛奶的检测试剂盒在区分水牛和奶牛奶中的应用，其特征在于所述的试剂盒包括权利要求2中所述的检测引物；

所述的水牛为摩拉水牛；所述的奶牛为荷斯坦奶牛。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：

所述的检测试剂盒包括针对权利要求1中所述miR-2285t的反转录试剂、反转录引物、特异性引物、内参引物、荧光定量PCR反应液。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：

所述的针对所述miR-2285t的反转录引物序列为SEQ ID NO：2。

6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：

所述的内参引物包括GAPDH内参基因的上游引物和下游引物，上游引物序列为SEQ IDNO：5，下游引物序列为 SEQ ID NO：6。

7.一种用于区分水牛和奶牛奶的检测方法，其特征在于包括如下步骤：

1）提取水牛和奶牛奶样品外泌体中总RNA；

2）通过反转录引物在反转录酶的作用下进行miR-2285t反转录成cDNA；

3）在荧光实时定量PCR仪上将步骤2）获得的cDNA和内参基因进行扩增检测；

4）通过溶解曲线分析，2^-ΔΔCt法进行相对定量；

所述的水牛为摩拉水牛；所述的奶牛为荷斯坦奶牛。