[发明专利]一种异枝江蓠原生质体的制备方法

权利要求书

1.一种异枝江蓠原生质体的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：

（1）首先，挑选幼嫩且活力旺盛的藻体，清洗干净后用0.5g/L I₂-KI溶液浸泡10s，后用大量的消毒海水进行冲洗，并放入消毒海水中暂养后，取出藻体，吸水纸将藻体上水分吸干后用解剖刀将藻体切碎，得到材料；

（2）配制消化用酶液；

（3）将步骤（1）中得到的材料加入步骤（2）配制好的消化用酶液中，所述材料与消化用酶液的质量体积比为1g/10mL，放入25-30℃的恒温摇床上进行黑暗酶解，每30 min镜检一次，观察并拍照，反应2-3h后，得到酶解液；

（4）用筛绢对步骤（3）中得到的酶解液进行过滤，去除未消化的细胞、细胞团和碎片，取上清液进行离心处理，使单细胞原生质体下沉，细胞碎片留在上清液中，弃去上清液，用含有1mol/L的葡萄糖的消毒海水进行冲洗离心2-3次，收集沉淀后用含有1mol/L的葡萄糖的消毒海水悬浮至1 mL，制得异枝江蓠原生质体；

步骤（2）中所述的消化用酶液为：自制纤维素酶与消毒海水的混合液，每10 mL消化用酶液由1.5 mL的自制纤维素酶和8.5 mL的消毒海水组成；

所述的自制纤维素酶的制备方法为：配制50mmol/L醋酸缓冲液并调整pH为4.8-5.0，分别按1g/10mL的量加入纤维素酶，充分溶解，并调整自制纤维素酶的最终浓度为2%，即得自制纤维素酶；

步骤（3）中所述的材料与消化用酶液的质量体积比为1g/10mL，表示每 10 mL制备好的消化用酶液加入1.0 g材料；

步骤（1）中所述的暂养温度为24℃，光照强度为3000lx，暂养时间为1-2天；

步骤（4）中所使用的筛绢目数为200目，所述的离心的速度为800rpm，离心的时间为10min。