[发明专利]一种CRISPR分型PCR的方法及其应用有效
| 申请号： | 201810271385.3 | 申请日： | 2018-03-29 |
| 公开（公告）号： | CN108486234B | 公开（公告）日： | 2022-02-11 |
| 发明（设计）人： | 王进科;张贝贝 | 申请（专利权）人： | 东南大学 |
| 主分类号： | C12Q1/686 | 分类号： | C12Q1/686 |
| 代理公司： | 南京苏高专利商标事务所(普通合伙) 32204 | 代理人： | 孙斌 |
| 地址： | 211102 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 crispr pcr 方法 及其 应用 | ||
1.一种非诊断的CRISPR分型PCR方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）建立CRISPR分型PCR反应：将CRISPR相关核酸酶、靶向目标DNA的sgRNA及PCR反应试剂加入PCR反应体系中建立CRISPR分型PCR反应体系；
（2）运行CRISPR分型PCR程序：建立CRISPR分型PCR反应体系后在PCR反应程序前加入一个短时间恒温孵育程序，之后启动PCR扩增程序；所述在PCR反应程序前加入一个短时间恒温孵育程序指将步骤（1）组建完成的CRISPR分型PCR反应体系先37℃恒定温度保持30min，所述37℃恒定温度保持30min为让CRISPR分型PCR反应中CRISPR相关核酸酶与一对sgRNA组装成复合物并切割靶DNA的温度和时间。
2.根据权利要求1所述的CRISPR分型PCR的方法，其特征在于，步骤（1）所述CRISPR相关核酸酶包括Cas9蛋白，或与Cas9类似的CRISPR相关核酸酶Cpf1。
3.根据权利要求1或2所述的CRISPR分型PCR方法，其特征在于，步骤（1）所述靶向目标DNA的sgRNA为CRISPR相关核酸酶匹配的引导RNA。
4.根据权利要求1所述的CRISPR分型PCR的方法，其特征在于，步骤（1）所述PCR反应试剂为普通PCR反应试剂、荧光定量PCR反应试剂或数字PCR反应试剂。
5.根据权利要求4所述的CRISPR分型PCR的方法，其特征在于，步骤（1）所述PCR反应试剂为荧光定量PCR反应试剂。
6.根据权利要求1所述的CRISPR分型PCR方法，其特征在于，步骤（1）所述PCR反应试剂中包括PCR引物，所述PCR引物为单一序列引物，或者简并序列引物；所述引物为将含有靶DNA序列的DNA片段从待检测DNA样品中PCR扩增出来的一对引物。
7.一种权利要求1所述的CRISPR分型PCR方法在DNA检测和分型中的应用。
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