[发明专利]重组绒促性素rhCG的制备方法及应用

说明书

本发明涉及重组绒促性素rhCG的制备方法，利用哺乳动物真核表达系统表达重组绒促性素rhCG；所述重组绒促性素rhCG包含α和β亚基，二者通过范德华力连接。本发明的重组绒促性素rhCG用于鱼类的催产，比目前生产用的尿源hCG质量更稳定、纯度更高、杂质更少，催产效果更好，可替代尿源hCG在鱼类繁殖中的应用。本发明还涉及重组hCG在淡水鱼人工繁殖领域的应用。

技术领域

本发明涉及生物医药和动物繁殖技术领域，具体地说，涉及重组绒促性素rhCG的制备方法及应用。

背景技术

鱼类繁殖与所处的生态环境密切相关，一般情况下，生态因素，如营养、温度、光照、水流等，是鱼类性腺发育的决定因素。然而人工繁殖条件下，池塘中缺乏江河具备的综合生态条件(如水的流速，水位的骤变等)，有的家鱼性腺不能发育成熟，如青鱼亲鱼性腺一般很难达到Ⅳ期末；即使性腺发育成熟的家鱼，在池塘中也不能自行排卵，须人工注射催产剂方能排卵受精。人工注射催产剂的目的是：一方面使某些在人工条件下性腺不能自行成熟的鱼类(如青鱼)发育成熟以产卵排精；另一方面也促使能产卵产精的鱼类集中同期排卵产精便于统一的繁殖管理。

适时催产，合理使用催产剂，对鱼类繁殖至关重要。目前生产上常用的催产剂主要有人工合成类似物(LRH-A)、鱼脑垂体(PG)、人绒毛膜促性腺激素(绒促性素，hCG)和地欧酮(DOM)。不同种类的亲鱼对不同催产剂的敏感性差异很大，在实际应用中需选择对该亲鱼敏感的催产剂，或者将几种催产剂配合使用，效果比单一催产剂好。

hCG是一种由人胎盘合体滋养层细胞分泌的糖蛋白激素，包括α和β两个非共价键结合的亚基。hCG促进雌性生物卵母细胞的发育成熟和黄体的形成，促进雄性生物精子的生成。hCG在人医临床上常用于辅助生殖治疗，治疗不孕不育。hCG在动物繁殖生产上常用于猪、牛、羊的同期发情和超数排卵。hCG在鱼类繁殖方面主要用于鱼类的人工催熟催产、排卵产精，是鱼类人工繁殖的首选催产剂之一。

目前商品化hCG主要是从孕妇尿中提取纯化的，但是大规模收集孕妇尿难度大、成本高，纯化得到的hCG产品批次差异大，且存在尿液供体带来的安全风险。此外hCG对光线、温度和酸度等条件极为敏感，收集的尿液若不及时提取，很容易失去生物学活性，造成资源的浪费。因此，人们已经利用基因工程技术开发新型人用重组hCG产品，如默克雪兰诺的Ovidrel(重组人绒促性素注射液)、丽珠的注射用绒促性素(丽珠目前是尿源hCG)，重组hCG产品质量相对均一、纯度高、杂质少、安全系数大，逐渐取代人用尿源hCG产品。

目前重组蛋白常用的表达系统主要有：大肠杆菌、酵母、昆虫细胞和哺乳动物细胞。每种表达系统都有各自的优势和不足，需根据目的蛋白和表达系统的特点，选择合适的表达系统。大肠杆菌表达系统生产成本低、产量高、表达流程简单快速，但因缺乏蛋白质翻译后的加工机制，如糖基化，正确折叠等，不适合表达复杂和大多数动物细胞蛋白。酵母表达系统兼有原核和高等真核表达系统的优点，收获的蛋白具有一定的翻译后加工能力，但是仍存在不足，如容易形成蛋白多聚体和过度糖基化，因此更适合表达简单的真核生物蛋白。昆虫表达系统可以表达高等真核生物蛋白，能对蛋白进行正确折叠和修饰，但蛋白含量低，难以形成种子批。哺乳动物细胞表达系统能对蛋白进行正确折叠和复杂的糖基化修饰，适合表达复杂高等真核生物蛋白；但是表达流程复杂，周期长，成本较高。在实际应用中，应根据不同的表达要求，选用适合的表达系统和策略。hCG是一种由人胎盘合体滋养层细胞分泌的糖蛋白激素，包括α和β两个非共价键结合的亚基。理论上用哺乳动物细胞来表达生产生殖激素蛋白，其空间结构和糖基化更接近天然产物，可保证其生理活性。

目前动保行业应用的hCG仍主要从孕妇尿液中提取，尚无重组hCG产品的相关报道。

发明内容

本发明的目的是提供重组绒促性素rhCG的制备方法。

本发明的另一目的是提供重组绒促性素rhCG的应用。

本发明的再一目的是提供一种鱼类催产的方法。