[发明专利]一种人肺间充质干细胞的贮存液

说明书

本发明涉及一种人肺间充质干细胞的贮存液，具体的，本发明的人肺间充质干细胞的贮存液由基础培养液和活性保持肽组成。该贮存液能够大幅度的提高人肺间充质干细胞的冻存安全性和稳定性，从而使得细胞活率提高。

技术领域

本发明涉及干细胞技术领域，具体涉及一种人肺间充质干细胞的贮存液。

背景技术

间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)是最先从骨髓中分离出来的一群具有一定自我更新和多向分化潜能的干细胞。特定的诱导条件下能向骨、软骨、脂肪、肌肉等多种间质系统细胞分化。由于这些细胞最终可分化为间质系统细胞，因此被命名为间充质干细胞。骨髓被认为是MSC的主要居住场所。近年来许多学者在骨髓以外的组织器官中也分离出MSC，包括肌肉、脂肪、骨实质、胰腺、肺脏、胸腺、脐带和胎盘等几乎机体所有的组织和器官。体外和体内实验均证明了MSC及其分化细胞可给予造血细胞结构和功能上的支持，具有造血调节作用。MSC具有易于外源基因转染和转染后外源基因可以稳定表达的优点，亦可作为良好的基因治疗载体，进行疾病治疗。MSC成为了组织工程和骨髓移植细胞治疗的研究热点。

间充质干细胞用于临床应用研究的种类主要是骨髓间充质干细胞和脐带间充质干细胞，这两类细胞都具有间充质干细胞共同的特点低免疫源性，特别是后者更为明显。脐带中组织结构简单，除了主要的大血管，其余均以结缔组织为主，造成了脐带间充质干细胞基本未与抗原接触，所以免疫源性很低，这极大的增加了临床应用的可能性。

但是最新的研究表明，与异体干细胞相比，自体干细胞治疗更有优越性，如避免了可能存在的感染风险，以及潜在的免疫排斥反应等。自体干细胞分离和培养一般有几个途径，如骨髓的干细胞分离，脐带血的干细胞分离以及组织器官特异性的干细胞分离。有研究显示肺损伤后的修复主要来源于肺组织内的干细胞。组织原位的干细胞在调节炎症反应，组织修复，纤维化控制，血管再生等方面有重要作用。因此，对于肺部疾病的治疗，直接分离出肺的干细胞进行培养后回输治疗肺部疾病有特别的意义。

目前在动物实验上分离肺组织的干细胞往往需要先分离出肺组织，剪碎，研磨，培养，流式细胞仪筛选后继续培养，然后再进行干细胞的鉴定。过程复杂，更重要的是需要把肺切碎。另外一种方法是通过肺泡灌洗分离肺原位干细胞。这个方法已经在动物实验和志愿者身上进行了探索。动物实验的研究结果表明单纯支气管肺泡灌洗能得到的干细胞数目很少，对进行实验研究造成了极大的不便。如果能预处理肺脏，然后进行肺泡灌洗，明显提高原位干细胞分离效率的话，不仅是一个重要的新型技术，而且会有潜在的重要临床应用价值。

CN102559591A中提供了一种提取肺间充质干细胞的方法，包括：在肺泡内给药角质细胞生长因子-2(KGF-2)或角质细胞生长因子(KGF)以富集肺间充质干细胞，然后进行肺泡灌洗，将所得的灌洗液中的肺间充质干细胞分离后进行纯化，得到肺间充质干细胞。但是该方法只是制备得到了间充质干细胞，但是并不能长期稳定的贮存，以方便后续使用。因此，如何快速、有效地制备高品质的间充质干细胞用于临床和科研是目前干细胞的热点研究内容之一。由于受到技术水平所限，目前间充质干细胞制备以及贮存过程还是研究不够透彻，没有具体的标准规范生产流程，难以满足广泛的需求，继续得到改进。

发明内容

本发明针对现有技术中存在的问题，提供一种维持肺间充质干细胞原始功能，同时又能很好的保持冻存活性的细胞贮存液，用于冻存人肺间充质干细胞。

本发明还提供一种制备所述人肺间充质干细胞的贮存液的方法。

本发明通过以下技术方案实现该目的：