[发明专利]一种利用成熟莲胚进行快繁的方法

权利要求书

1.一种利用成熟莲胚进行快繁的方法，包括以下步骤：

1)预处理

带壳莲子洗净，在莲子壳基部破孔，不可伤害内部子叶；

2)制备外植体

将有孔的带壳莲子先进行常规的表面消毒，之后用无菌水润洗3-4次，再用体积分数为1-2％的PPM溶液浸泡16-24h进行二次表面消毒，再转至体积分数为0.05-0.1％的PPM溶液中浸泡24-48h进行萌发；

待莲子萌发破壳后，剖开子叶，取出莲胚，切除莲胚的第一片幼叶，保留顶点及第二片幼叶，得到外植体；

3)初代培养

将得到的外植体接种至初代培养基中，进行初代培养，培养40-50天，得到初代丛芽；培养条件为：25±2℃，光强2500-3000lx，光照14-16h/d；所述的初代培养基中为：MS基础培养基，6-BA2.5-3.5mg/L，NAA 0.05-0.1mg/L，蔗糖25-30g/L，Phyta gel 3-4g/L，pH＝5.75-5.85；

4)增殖培养

将得到的初代丛芽接种至增殖培养基中，进行增殖培养，培养条件同3)，培养40-60天，获得增殖丛芽；

其中，所述的增殖培养基为由无菌水和固体培养基组成的固液双相培养基，无菌水的用量为固体培养基体积的1/3-1/2；所述的固体培养基为：MS基础培养基，6-BA 1-1.5mg/L，NAA 0.05-0.1mg/L，蔗糖25-30g/L，Phyta gel 3-4g/L，pH＝5.75-5.85；

5)生根培养

将获得的增殖丛芽分离成单芽接种至生根培养基中，进行生根培养，培养条件同3)，培养15-30天，获得生根的荷花组培苗；所述的生根培养基为：1/2MS基础培养基，NAA 0.1-0.2mg/L，蔗糖10-15g/L，Phyta gel 3-4g/L，pH＝5.75-5.85；

6)炼苗、移栽

将组培苗洗净后，浸泡在水中，于弱光下放置2-3天后，栽至灭菌塘泥中，弱光下覆膜保湿培养，一周后去掉覆膜并转移至正常光照下培养，获得荷花幼苗。

2.根据权利要求1所述利用成熟莲胚进行快繁的方法，其特征在于，步骤1)中，洗净的带壳莲子经过紫外照射10-15min后再破孔。