[发明专利]多信号荧光探针的合成及其同时区分检测Hcy、Cys和GSH的应用

权利要求书

1.多信号荧光探针，其特征在于，所述的荧光分子探针的化学结构通式如下所示：

其中，R＝烷基。

2.一种权利要求1所述的多信号荧光探针的制备方法，其特征在于，所述荧光分子探针的制备方法包括以下步骤：

步骤1.合成9-羟基-2,3,6,7-四氢-1H，5H，11H吡喃并[2,3-F]吡啶并[3,2,1-ij]喹啉-11-酮

a.将适量丙二酸二苯酯与8-羟基久洛里定加入无水甲苯中，100℃反应8-12小时，

b.待反应冷至室温后过滤，固体用乙醚洗涤后真空干燥，得到灰绿色固体9-羟基-2,3,6,7-四氢-1H，5H，11H吡喃并[2,3-F]吡啶并[3,2,1-ij]喹啉-11-酮；

步骤2.合成9-氯-11-氧代-2,3,6,7-四氢-1H，5H，11H吡喃并[2,3-F]吡啶并[3,2,1-ij]喹啉-10-甲醛

I.在氮气保护条件下，将适量干燥重蒸的N,N-二甲基甲酰胺(DMF)缓慢加入等体积的三氯氧磷(POCl₃)中，在20-50℃搅拌30分钟，得红色溶液，

II.将9-羟基-2,3,6,7-四氢-1H，5H，11H吡喃并[2,3-F]吡啶并[3,2,1-ij]喹啉-11-酮溶于适量N,N-二甲基甲酰胺中，逐滴加入到步骤I的混合溶液中，混合物继续在氮气保护下60℃搅拌反应12小时；

III.将步骤II中的反应液倒入适量冰水中，用20％的NaOH溶液调节pH至5～6，产生大量沉淀，过滤，固体用适量去离子水洗涤3次，真空干燥，得9-氯-11-氧代-2,3,6,7-四氢-1H，5H，11H吡喃并[2,3-F]吡啶并[3,2,1-ij]喹啉-10-甲醛；

步骤3.合成多信号荧光探针(E)-3-(9-氯-11-氧代-2,3,6,7-四氢-1H，5H，11H-吡喃并[2,3-f]吡啶并[3,2,1-ij]喹啉-10-基)-2-氰基丙烯酸烷基酯

i.将9-氯-11-氧代-2,3,6,7-四氢-1H，5H，11H吡喃并[2,3-F]吡啶并[3,2,1-ij]喹啉-10-甲醛和相应的氰乙酸烷基酯加入适量无水二氯甲烷中，滴加适量三乙胺，室温搅拌反应；

ii.将步骤i中反应液滴加入适量无水乙醇中，过滤，将所得固体真空干燥，得权利要求1所述的荧光分子探针(E)-3-(9-氯-11-氧代-2,3,6,7-四氢-1H，5H，11H-吡喃并[2,3-f]吡啶并[3,2,1-ij]喹啉-10-基)-2-氰基丙烯酸烷基酯。

3.如权利要求2所述的多信号荧光探针的制备方法，其特征在于，所述步骤i的9-氯-11-氧代-2,3,6,7-四氢-1H，5H，11H吡喃并[2,3-F]吡啶并[3,2,1-ij]喹啉-10-甲醛和氰乙酸烷基酯的摩尔比为1:1.5-2。

4.如权利要求1所述的多信号荧光探针在制备环境中定量检测Hcy、Cys和GSH，在细胞内同时区分成像Hcy、Cys和GSH的器件的应用。