[发明专利]一种利用拉曼成像技术检测耐药性的方法及其应用

说明书

本发明公开了一种利用拉曼成像技术检测耐药性的方法，所述方法包括如下步骤：(1)分别对肿瘤细胞系野生型和耐药型进行耐药处理，随后分别取每个细胞核仁区和细胞质区域作为拉曼成像技术检测样本；(2)通过扫描步骤(1)得到的检测样本制作拉曼参考光谱，并得出耐药型细胞的特征峰；(3)利用拉曼光谱仪检测未知待检样品，以得到待检样品的拉曼光谱；(4)分析步骤(3)得到的待检样品的拉曼光谱中是否出现与拉曼参考光谱相同的特征峰，即根据耐药的肿瘤细胞拉曼光谱的特征峰峰位与强度进行定性识别。本发明提供的用拉曼成像技术检测耐药性的方法，检测速度快，效率高，对于临床检测细胞耐药性具有重要的实际应用价值。

技术领域

本发明涉及医药检测技术领域，具体涉及一种利用拉曼成像技术检测耐药性的方法及其应用。

背景技术

拉曼成像技术是新一代快速、高精度、面扫描激光拉曼技术，它将共聚焦显微镜技术与激光拉曼光谱技术完美结合，作为第三代Raman技术，具备高速、极高分辨率成像的特点。相对于原来的传统拉曼应用技术而言，新一代拉曼成像速度是常规Raman mapping的300-600倍，一般在几分钟之内即可获取样品高分率的拉曼图像。

耐药性(drug resistance)又称抗药性，系指微生物、寄生虫以及肿瘤细胞对于化疗药物作用的耐受性，耐药性一旦产生，药物的化疗作用就明显下降。耐药性根据其发生原因可分为获得耐药性和天然耐药性。自然界中的病原体，如细菌的某一株也可存在天然耐药性。肿瘤是一组由肿瘤驱动基因所致的恶性疾病，具有高发病率、高死亡率的特征。肿瘤治疗过程中遇到的最大挑战是治疗耐药的问题。靶向治疗导致耐药这一点已经被临床实践证实，因此，迫切需要从源头上搞清楚肿瘤为什么会耐药，才能真正的“对症下药”，从而尽可能的延缓耐药。然而肿瘤时时刻刻在动态变化，不断诞生出新肿瘤细胞，其中就包括一些变异的后代，因此可以说耐药是“肿瘤进化”的结果。

目前，耐药性检测一般为分子水平的检测或细胞水平的检测，程序一般都比较复杂，还没有将拉曼成像技术应用于耐药性检测上。

综上所述，如何快速有效地解决药品是否耐药的技术问题，是目前本领域技术人员急需解决的问题。

发明内容

为了快速有效地检测耐药的问题，本发明的目的在于提供一种利用拉曼成像技术检测耐药性的方法。

本发明的目的还在于提供所述方法在检测细胞耐药性中的应用。

为实现上述目的，本发明首先提供一种利用拉曼成像技术检测耐药性的方法，所述方法包括如下步骤：

(1)分别对肿瘤细胞系野生型和耐药型进行耐药处理，随后分别取每个细胞核仁区和细胞质区域作为拉曼成像技术检测样本；

(2)通过扫描步骤(1)得到的检测样本制作拉曼参考光谱，并得出耐药型细胞的特征峰；

(3)利用拉曼光谱仪检测未知待检样品，得到待检样品的拉曼光谱；

(4)分析步骤(3)得到的待检样品的拉曼光谱中是否出现与拉曼参考光谱相同的特征峰，即根据耐药的肿瘤细胞拉曼光谱的特征峰峰位与强度进行定性识别，实现对细胞是否产生耐药性的鉴定。

优选的，所述肿瘤细胞包括肺癌、肝癌、卵巢癌、子宫癌或乳腺癌细胞。

更优选的，所述肿瘤细胞为肺癌肿瘤细胞，所述耐药处理的试剂为紫杉醇类试剂。

优选的，所述耐药的肿瘤细胞拉曼光谱的特征峰为在细胞的细胞质区域出现1515cm-1～1525cm-1振动峰。

更优选的，所述耐药的肿瘤细胞拉曼光谱的特征峰为在细胞的细胞质区域出现β-胡萝卜素的振动峰1520cm-1。

优选的，所述拉曼光谱仪检测条件为波长为532nm，在样品平面上激发功率为235μW/μm2。