[发明专利]山茱萸提取物制备莫诺苷的方法

说明书

本发明涉及一种山茱萸提取物制备高纯度莫诺苷的方法。山茱萸提取物经大孔吸附树脂富集和正相硅胶初步分离后，再经中压反相硅胶色谱柱，流动相为乙醇和水，进行梯度洗脱，将富含莫诺苷的洗脱液减压浓缩得到纯度≧90％的莫诺苷粗品；最后经Sephadex LH‑20凝胶柱色谱进行纯化，采用氯仿和甲醇混合溶剂进行洗脱，洗脱液减压蒸干得到纯度≧98％的莫诺苷。本方法分离效果显著，速度快、效率高，同时操作简单易行，条件温和。

技术领域

本发明涉及一种山茱萸提取物制备高纯度莫诺苷的方法，尤其涉及一种采用对莫诺苷有显著分离纯化效果的中压反相硅胶柱色谱并结合Sephadex LH-20(羟丙基葡聚糖凝胶)凝胶柱色谱制备高纯度目标化合物的分离方法。

背景技术

山茱萸是一种应用十分广泛的常用中药，具有抗老年痴呆、抗肿瘤、保护心血管等药理作用。莫诺苷是其中主要成分之一，药理研究表明，莫诺苷具有抗炎、抗氧化，神经保护等作用。近年来研究表明莫诺苷在抗老年痴呆活性方面有极好的开发应用潜力。寻找简单易行的从山茱萸中制备高纯度莫诺苷的方法，对莫诺苷的进一步研究和开发利用具有重要价值。然而，截止目前，还没有从山茱萸或其提取物中制备高纯度莫诺苷的方法。

有多篇专利报道了从山茱萸中制备莫诺苷的方法：中国专利CN 1569867 A采用大孔树脂除杂，再用高效液相制备得到纯度95.81％的莫诺苷，此方法需要使用高效液相色谱仪，设备和色谱柱成本高，且一次制备量少，不适合大量制备；中国专利CN 101385735 A中报道，经过两次大孔树脂分离后，重结晶得到纯度为95％的莫诺苷，但此专利报道的第一次大孔树脂柱，需要将提取液酸化，这可能会导致莫诺苷结构的变化，同时重结晶纯化的方法，费事费力，且能拿到高纯度目标化合物的量也很有限；中国专利CN 101336927 A、CN101974048 A和CN 104987354 A都是采用重结晶的方式纯化得到莫诺苷，很明显，这种方法很难实现大量制备高纯度的莫诺苷且费时长；中国专利CN 102127140 A采用大孔树脂除杂，正丁醇萃取得到莫诺苷，纯度仅为60％-70％，纯度太低。

发明内容

本发明的目的在于针对现有制备方法和技术中制备纯化莫诺苷存在的不足，提出一种制备方法简单、容易操作，得率高且适合规模化生产制备高纯度莫诺苷的方法。本发明方法简单易行，且可以大量制备得到纯度≧98％(质量％，以下相同)的高纯度莫诺苷。

一种山茱萸提取物制备高纯度莫诺苷的方法，山茱萸提取物经大孔吸附树脂富集和正相硅胶初步分离后，还包括以下步骤：

(1)中压反相硅胶柱分离：将经大孔吸附树脂富集和正相硅胶初步分离得到的含莫诺苷样品用水溶解，经中压反相硅胶色谱柱，流动相为乙醇和水，进行梯度洗脱，将富含莫诺苷的洗脱液减压浓缩，得到纯度≧90％的莫诺苷粗品；

(2)凝胶柱纯化：纯度≧90％的莫诺苷粗品经Sephadex LH-20凝胶(羟丙基葡聚糖凝胶)柱进行纯化，采用氯仿和甲醇混合溶剂进行洗脱，洗脱液减压蒸干得到高纯度的莫诺苷。

步骤(1)中，中压反相硅胶柱分离采用仪器为中压色谱仪，压力在0-50MPa之间，使用时压力在5-25MPa之间；用中压反相硅胶柱色谱分离，柱层析为反相硅胶柱，所用反相硅胶填料为C18填料。

中压反相硅胶分离时，反相硅胶柱层析为中压柱层析，采用湿法上样，流动相为乙醇和水的混合溶剂，乙醇与水的体积比为5:95～10:90进行梯度洗脱后，根据硅胶薄层色谱和高效液相色谱合并相同组分，减压浓缩得到纯度≧90％的莫诺苷粗品。中压反相硅胶柱层析(湿法上样)所得莫诺苷除少量样品纯度≧98％外，绝大部分纯度≧90％。

优选的，溶剂洗脱流速为10-50ml/min，每一个梯度洗脱3-5个柱体积。流动相按照乙醇与水的体积比分别为5:95、7:93、8:92、10:90进行梯度洗脱。