[发明专利]一种基于微小RNA的鉴定脐带间充质干细胞冻存时间的基因检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种基于微小RNA的鉴定脐带间充质干细胞冻存时间的基因检测试剂盒，包括用于测定hsa‑miR‑615‑3p、hsa‑miR‑455‑5p和hsa‑miR‑219b‑3p表达水平的qPCR引物；所述鉴定脐带间充质干细胞冻存时间指鉴定区分冻存1～6月脐带间充质干细胞和冻存7～12月脐带间充质干细胞。本发明可以快速确定待测冻存脐带间充质干细胞是冻存1～6月还是冻存7～12月的脐带间充质干细胞。

技术领域

本发明属于基因检测领域，涉及一种鉴定间充质干细胞冻存时间的基因检测试剂盒。

背景技术

间充质干细胞中最热门、最具前景的当属骨髓间充质干细胞和脐带间充质干细胞。

近年来液氮冷冻保存骨髓间充质干细胞或脐带间充质干细胞技术得到广泛应用。然而液氮冻存细胞的缺点是其极易挥发，长期冻存会造成液氮消耗，必须及时补充。因此，很多研究机构都采用-80℃对骨髓间充质干细胞或脐带间充质干细胞进行冻存保护(不超过12个月)。

但是，-80℃冻存时间对骨髓间充质干细胞或脐带间充质干细胞生物学特性及增殖活力的影响还未有统一定论。一般而言，根据文献及长期研究经验，-80℃冻存1～6个月基本不会明显影响骨髓间充质干细胞或脐带间充质干细胞的生物学特性及增殖活力，而-80℃冻存7～12个月的骨髓间充质干细胞或脐带间充质干细胞的细胞核和细胞质稳定性会变差，增殖能力和分化能力会受到较大影响，造成实验重复性差(参考文献：低温冻存对人脐带间充质干细胞生物学特性的影响，军医进修学院学报，2012年第33卷第11期；骨髓间充质干细胞在-80℃低温条件下的冻存，中国组织工程研究，2016年第20卷第10期)。因此，研究者通常选用-80℃冻存1～6个月内的骨髓间充质干细胞或脐带间充质干细胞作为种子细胞进行研究。

但是，现有技术存在如下不足：

第一，实验室于-80℃冰箱冻存作为种子细胞的骨髓间充质干细胞或人脐带间充质干细胞常常因标签损坏而无法确定该骨髓间充质干细胞或人脐带间充质干细胞的冻存时间；

第二，虽然可以将骨髓间充质干细胞或人脐带间充质干细胞复苏后，通过测定其增殖活力和表型大概判断该细胞的冻存时间，但该方法先要将冻存的骨髓间充质干细胞或人脐带间充质干细胞复苏，然后体外培养，再测试其增殖活力和表型，耗时费力。

本发明旨在提供一种解决上述不足的技术方案，以鉴定骨髓间充质干细胞或人脐带间充质干细胞冻存时间，同时不需要对冻存的细胞进行复苏即可操作。

发明内容

本发明目的在于提供一种鉴定骨髓间充质干细胞或人脐带间充质干细胞冻存时间的基因检测试剂盒，以快速确定待测冻存骨髓间充质干细胞或脐带间充质干细胞是冻存1～6月还是冻存7～12月的骨髓间充质干细胞或脐带间充质干细胞。

上述目的通过如下技术方案实现：

骨髓间充质干细胞-长链非编码RNA

一种基于长链非编码RNA的鉴定骨髓间充质干细胞冻存时间的基因检测试剂盒，包括用于测定LncRNA AK046999、LncRNA CDKN2B和LncRNA AK043773表达水平的qPCR引物；所述鉴定骨髓间充质干细胞冻存时间指鉴定区分冻存1～6月骨髓间充质干细胞和冻存7～12月骨髓间充质干细胞。

优选地，所述测定LncRNA AK046999、LncRNA CDKN2B和LncRNA AK043773表达水平指测定LncRNA AK046999、LncRNA CDKN2B和LncRNA AK043773相对于内参U6的相对表达水平。

LncRNA AK046999的qPCR上游引物为5'-TCTAAGAGTTTCGGCGAGCACCT-3'；