[发明专利]一种肿瘤耐药性相关蛋白的免疫印迹检测方法

权利要求书

1.一种肿瘤耐药性相关蛋白的免疫印迹检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、提取目的蛋白及电泳：提取肿瘤组织标本中的肿瘤耐药性相关蛋白样品，测定蛋白浓度后分装于液氮中保存，制备SDS-PAGE凝胶，按15μL体系将6倍SDS上样缓冲液与20μg蛋白样品混合后，再与预染指示剂一同上样，加入1倍Tris-SDS-PAGE电泳缓冲液，进行电泳；

S2、转膜：电泳结束后，将目的蛋白所在位置凝胶切下，剪取PVDF膜，按照滤纸、PVDF膜、胶、滤纸由下往上顺序排列，赶走多余气泡，放入半干转膜仪中恒压25V、转印40min；

S3、封闭：转膜结束后加入适量封闭液室温振摇孵育30min；

S4、抗体孵育：加入稀释后的一抗室温振摇孵育2h，洗涤液洗去未结合的抗体；加入稀释后的二抗室温孵育1h，洗涤液洗去未结合的抗体；

S5、显色：加入1ml超敏发光液室温反应30s，放入凝胶成像仪器中采集信号，观察蛋白的表达。

2.根据权利要求1所述的一种肿瘤耐药性相关蛋白的免疫印迹检测方法，其特征在于，步骤S1中采用钙盐沉淀法提取肿瘤组织标本中的肿瘤耐药性相关蛋白。

3.根据权利要求2所述的一种肿瘤耐药性相关蛋白的免疫印迹检测方法，其特征在于，步骤S1中所述上样缓冲液与蛋白样品混合后，室温静置10-15min。

4.根据权利要求3所述的一种肿瘤耐药性相关蛋白的免疫印迹检测方法，其特征在于，步骤S1中开始电泳时恒压80V，待样品跑至两胶分离处并充分压至线性时，将电压调至120V，继续电泳约75min直至指示剂跑至凝胶底部。

5.根据权利要求4所述的一种肿瘤耐药性相关蛋白的免疫印迹检测方法，其特征在于，步骤S2中PVDF膜先经甲醇活化30s，再进行组装。

6.根据权利要求5所述的一种肿瘤耐药性相关蛋白的免疫印迹检测方法，其特征在于，步骤S4中一抗稀释比例为1:300。

7.根据权利要求1所述的一种肿瘤耐药性相关蛋白的免疫印迹检测方法，其特征在于，步骤S4中二抗稀释比例为1:3000。