[发明专利]基于超高效液相色谱法测定干果中多种酸性染料的方法

权利要求书

1.基于超高效液相色谱法测定干果中多种酸性染料的方法，其特征在于：包括以下步骤，

步骤（A），标准储备液和标准工作液的配制

（A1），选择标准试剂品，包括乙腈、乙酸铵；

（A2），分别称取0.025 g的各种标准试剂品，用水溶解并定容于25 mL的棕色容量瓶中，且均配制成质量浓度为1000 μg/mL的标准储备液；

（A3），将配置的各种标准储备液，在4 ℃下保存；

（A4），取各种标准储备液，用水混合稀释，制得所需浓度的标准工作液，乙腈标准工作液的质量浓度为850μg/mL，乙酸铵标准工作液的质量浓度为为550μg/mL；

（A5），将标准工作液密封，并于在4 ℃下保存，以供使用；

步骤（B），干果样品预处理

（B1），将干果样品粉碎，混合均匀后称取5.0 g样品，加入到20 mL的乙腈标准工作液；

（B2），通过超声波清洗器提取，并通过高速离心机离心，得到清液；

步骤（C），固相萃取处理

（C1），取离心过的清液5 mL加入活化过的免疫亲和柱，即依次通过1%吐温-20的1%吐温-20的PBS 4 mL和PBS 3 mL淋洗，用10 mL的试管盛接淋洗液；

（C2），将盛接淋洗液的试管用氮吹仪吹干，用1 mL的乙腈标准工作液溶解定容，过膜处理后得到测定溶液，进行超高效液相色谱测定；

步骤（D），配置超高效液相色谱仪的色谱条件

色谱柱为symmtery shield RP18柱250×4.6 mm，5 μm；柱温为30 ℃；检测波长为500nm；流动相为1 mL的乙腈标准工作液和20 mmoL乙酸铵标准工作液；流速为1.0 mL/min；检测器为紫外检测器；进样体积为10 μL；

步骤（E），通过超高效液相色谱对测定溶液内11种酸性染料进行色谱分析，得到干果内11种酸性染料的检出量，所述11种酸性染料，包括酸性橙10、酸性红1、酸性红14、媒介红3、酸性黑1、橙黄2、酸性黄73、酸性蓝62、酸性黄116、酸性黑24、酸性棕282。

2.根据权利要求1所述的基于超高效液相色谱法测定干果中多种酸性染料的方法，其特征在于：（A2），分别称取0.025 g的各种标准试剂品，称重精确度为0.0001 g。

3.根据权利要求1所述的基于超高效液相色谱法测定干果中多种酸性染料的方法，其特征在于：所述20 mmoL乙酸铵标准工作液的pH=4.5。

4.根据权利要求1所述的基于超高效液相色谱法测定干果中多种酸性染料的方法，其特征在于：（B2），通过超声波清洗器提取20 min，并通过高速离心机8000 r/min，离心5min，得到清液。