[发明专利]基于上转换荧光适配体传感器的双酚A和雌二醇检测试剂盒及应用和检测方法

权利要求书

1.一种基于上转换荧光适配体传感器的双酚A和雌二醇检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括以下组分：

（1）第一羧基化核/壳型上转换纳米颗粒NaYF4: Yb, Er@NaYF4: Nd；

（2）第二羧基化核/壳型上转换纳米颗粒NaYF4: Yb, Tm@NaYF4: Nd；

（3）目标物适配体序列和根据其互补链设计的适配体序列互补链正四面体结构的组成序列；所述目标物为双酚A和雌二醇；所述正四面体结构的组成序列包括：适配体序列的互补链序列，与所述互补链序列中至少一部分形成正四面体结构的序列；

（4）黑磷纳米金复合材料分散液；

双酚A适配体序列为如SEQ ID NO：1所示的序列；根据其互补链设计的正四面体结构的组成序列包括：如SEQ ID NO：2所示的序列，如SEQ ID NO：3所示的序列，如SEQ ID NO：4所示的序列，如SEQ ID NO：5所示的序列；

雌二醇适配体序列为如SEQ ID NO：6所示的序列；根据其互补链设计的正四面体结构的组成序列包括：如SEQ ID NO：7所示的序列，如SEQ ID NO：8所示的序列，如SEQ ID NO：9所示的序列，如SEQ ID NO：10所示的序列；

所述第一羧基化核/壳型上转换纳米颗粒和双酚A适配体序列以第一羧基化核/壳型上转换纳米颗粒偶联双酚A适配体序列的形式提供；所述第二羧基化核/壳型上转换纳米颗粒和雌二醇适配体序列以第二羧基化核/壳型上转换纳米颗粒偶联雌二醇适配体序列的形式提供；

双酚A适配体序列互补链正四面体结构序列和黑磷纳米金复合材料分散液以Au-S键结合的黑磷纳米金复合材料标记双酚A适配体序列互补链正四面体结构序列的形式提供；雌二醇适配体序列互补链正四面体结构序列和黑磷纳米金复合材料分散液以Au-S键结合的黑磷纳米金复合材料标记雌二醇适配体序列互补链正四面体结构序列的形式提供。

2.根据权利要求1所述的基于上转换荧光适配体传感器的双酚A和雌二醇检测试剂盒，其中，所述第一羧基化核/壳型上转换纳米颗粒和所述第二羧基化核/壳型上转换纳米颗粒的粒径为70-80nm，激发波长为808nm。

3.根据权利要求1所述的基于上转换荧光适配体传感器的双酚A和雌二醇检测试剂盒，其中，所述羧基化核/壳型上转换纳米颗粒通过包括以下步骤的方法制备：

（1）合成上转换纳米颗粒内核：将三氟乙酸钇、三氟乙酸镱、三氟乙酸铒与三氟乙酸钠、油酸、1-十八烯和油胺混合反应，制得第一核/壳型上转换纳米颗粒内核；将三氟乙酸钇、三氟乙酸镱、三氟乙酸铥与三氟乙酸钠、油酸、1-十八烯和油胺混合反应，制得第二核/壳型上转换纳米颗粒内核；

（2）制备核/壳型上转换纳米颗粒：将所述第一核/壳型上转换纳米颗粒内核和所述第二核/壳型上转换纳米颗粒内核各自分散于有机溶剂中，分别加入三氟乙酸钠、三氟乙酸钇、三氟乙酸钕、油酸、1-十八烯进行反应，制得第一核/壳型上转换纳米颗粒和第二核/壳型上转换纳米颗粒；

（3）制备羧基化核/壳型上转换纳米颗粒：将聚丙烯酸溶液分别与第一核/壳型上转换纳米颗粒和第二核/壳型上转换纳米颗粒混合，制得所述第一羧基化核/壳型上转换纳米颗粒和所述第二羧基化核/壳型上转换纳米颗粒。

4.根据权利要求1所述的基于上转换荧光适配体传感器的双酚A和雌二醇检测试剂盒，其中，所述黑磷纳米金复合材料分散液通过如下方法制得：将黑磷晶体粉末与聚乙烯吡咯烷酮水溶液混合，超声条件下进行反应，反应后离心去除未剥离完全的黑磷晶体沉淀，得到黑磷纳米片；将黑磷纳米片洗净后超声分散于水中，加入氯金酸水溶液，震荡混合反应，离心去上清，清洗沉淀后分散于水中，得到所述黑磷纳米金复合材料分散液。

5.权利要求1-4中任意一项所述的双酚A和雌二醇检测试剂盒在同时检测双酚A和雌二醇中的应用。

6.一种利用权利要求1-4中任意一项所述的双酚A和雌二醇检测试剂盒的双酚A和/或雌二醇的检测方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

1）建立目标物标准曲线：

1-1）将羧基化核/壳型上转换纳米颗粒偶联目标物适配体、多个浓度的目标物标准品溶于杂交缓冲液中；

1-2）分别加入双酚A和雌二醇的适配体序列互补链正四面体结构修饰的黑磷纳米金复合材料，剧烈震荡反应；

1-3）离心去除未连接的黑磷纳米金，用杂交缓冲液反复洗涤；

1-4）进行荧光检测，绘制目标物标准品的浓度与荧光猝灭值的标准曲线；

2）待测样品中双酚A和/或雌二醇的检测：

2-1）将羧基化核/壳型上转换纳米颗粒偶联目标物适配体溶于杂交缓冲液中；

2-2）加入含有双酚A和/或雌二醇的待测样品，震荡孵育；

2-3）加入双酚A和/或雌二醇的适配体序列互补链正四面体结构修饰的黑磷纳米金复合材料，剧烈震荡反应；

2-4）离心去除未连接的黑磷纳米金，用杂交缓冲液反复洗涤；

2-5）进行荧光检测；

2-6）根据步骤1）绘制的标准曲线，根据检测到的荧光猝灭值计算待测样品中双酚A和/或雌二醇的浓度。