[发明专利]一种丹参AP2转录因子SmERF128编码序列及克隆方法与应用有效

专利信息
申请号: 201810285885.2 申请日: 2018-04-03
公开(公告)号: CN108517323B 公开(公告)日: 2021-09-21
发明(设计)人: 宋经元;张瑜;季爱加 申请(专利权)人: 中国医学科学院药用植物研究所
主分类号: C12N15/29 分类号: C12N15/29;C07K14/415;C12N15/10;C12N15/11;C12N15/82;A01H5/06;A01H6/50;G01N33/68
代理公司: 北京慕达星云知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 11465 代理人: 赵徐平
地址: 100193 北京市海*** 国省代码: 北京;11
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摘要:
搜索关键词: 一种 丹参 ap2 转录 因子 smerf128 编码 序列 克隆 方法 应用
【权利要求书】:

1.一种转SmERF128基因调控丹参毛状根中二氢丹参酮I、隐丹参酮、丹参酮I、丹参酮IIA含量的方法,其特征在于,包括如下步骤:

步骤1.将核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的SmERF128基因分别构建过表达和RNAi载体;

步骤2.将SmERF128过表达及RNAi载体转化发根农杆菌ACCC10060,获得用于转化丹参的发根农杆菌菌株;

步骤3.将发根农杆菌菌株转化丹参叶片,获得经抗生素筛选、GFP荧光检测为阳性的转基因丹参毛状根;

步骤4.qRT-PCR测定转基因毛状根中SmERF128基因及丹参酮生物合成相关基因的相对表达量;

步骤5.超高效液相色谱测定转基因毛状根中丹参酮含量。

2.根据权利要求1所述的一种转SmERF128基因调控丹参毛状根中二氢丹参酮I、隐丹参酮、丹参酮I、丹参酮IIA含量的方法,其特征在于,步骤5所述的超高效液相色谱测定法如下:

ACQUITYC18色谱柱,流动相甲醇和水;检测波长255nm,柱温30℃,流速0.25mL/min,进样量5μL。

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