[发明专利]一种鼻咽癌患病风险检测试剂盒

说明书

本发明提供了一种鼻咽癌患病风险检测试剂盒，用于检测人ATF1rs11169571位点T/C突变，所述试剂盒包括：蛋白酶K、缓冲液GB、缓冲液GD、漂洗液PW、超纯水、ATF1上游引物，ATF1下游引物，Go Taq Green Master Mix 2x，RNase Free H₂O，Hind III酶，buffer10x，TBE缓冲液，琼脂糖，溴化乙锭，溴酚蓝指示剂；所述ATF1上游引物为5’‑CGCACGATATCTAGTGACAGAGG‑3’，所述ATF1下游引物为5’‑TGCAAACCTGTAGGGTAAATGG‑3’。

技术领域

本发明涉及生物技术检测领域，具体涉及一种鼻咽癌患病风险检测试剂盒及人ATF1 rs11169571单核苷酸多态性的测试方法。

背景技术

鼻咽癌(NPC)是我国南方常见的恶性肿瘤，广东为高发区。鼻咽癌是指鼻咽粘膜上皮发生的癌肿，大多为低分化鳞癌，其恶性度高，发病部位隐蔽，特别是在咽隐窝和鼻咽顶部者，早期症状不明显，因而难以早期发现，误诊误治率较高，可达12.2％，因而在确诊的鼻咽癌中，其5年生存率长期徘徊在50％～60％左右。对鼻咽癌进行早期诊断以便早期治疗，提高患者的生存率一直是NPC临床研究的重要课题之一。

目前对鼻咽癌早期的检测方法有多种，包括有：EB病毒血清学标记物如病毒壳抗原一免疫球蛋白、EB病毒潜伏膜蛋白、EB病毒早期复合抗原的抗体检测，鼻咽癌相关肿瘤标记物如白细胞介素、肿瘤坏死因子、细胞间黏附分子、CYFRA 2121以及端粒酶等的检测。虽然这些指标的单独或联合应用为鼻咽癌的诊断提供了有用的信息，然而它们均缺乏足够的灵敏度与特异性。建立一种能对鼻咽癌患者进行筛查、诊断的无创性检测方法，对鼻咽癌的早期筛查、诊断、预防及治疗等具有重要意义。

发明内容

本发明公开了一种鼻咽癌患病风险检测试剂盒及人ATF1rs11169571单核苷酸多态性的测试方法，通过使用本发明的检测试剂盒，实现了对人ATF1 rs11169571单核苷酸多态性的检测，根据所得的人ATF1 rs11169571位点T/C突变结果作为鼻咽癌患病风险的评价指标。

本发明的第一方面公开了一种鼻咽癌患病风险检测试剂盒，用于检测人ATF1rs11169571位点T/C突变，所述试剂盒包括：蛋白酶K、缓冲液GB、缓冲液GD、漂洗液PW、超纯水、ATF1上游引物，ATF1下游引物，Go Taq Green Master Mix 2x，RNase Free H₂O，HindIII酶，buffer 10x，TBE缓冲液，琼脂糖，溴化乙锭，溴酚蓝指示剂；所述ATF1上游引物为5’-CGCACGATATCTAGTGACAGAGG-3’，所述ATF1下游引物为5’-TGCAAACCTGTAGGGTAAATGG-3’。

本发明的第二方面公开了一种人ATF1rs11169571单核苷酸多态性的测试方法，其特征在于使用权利要求1所述的鼻咽癌患病风险检测试剂盒，包括以下步骤：

(1)血液基因组DNA的提取；

(2)将步骤1提取的DNA，ATF1上游引物，ATF1下游引物，Go Taq Green Master Mix2x，RNase Free H₂O加入PCR管中，在PCR仪中进行PCR反应；

(3)将步骤2得到的PCR产物，RNase Free H₂O，Hind III酶，buffer 10x进行酶切实验；

(4)通过水平式琼脂糖凝胶电泳法检测步骤3中的酶切产物；

(5)采用卡方检验，Logistics回归分析对步骤4的实验结果进行分析。

进一步地，所述步骤2中PCR仪的反应条件为：依次95℃5min，95℃40s，58℃40s，72℃40s，72℃5min进行45个循环。

发明的有益效果