[发明专利]一种检测白蛋白的方法

说明书

本发明公开了一种检测生物样品中白蛋白的方法，向含白蛋白的样品中，加入式(I)所示结构的荧光探针，在温度为20‑37℃条件下，培养20分钟以上；无需分离，直接检测培养液的黄色荧光强度；其中，式(I)所示结构的荧光探针如说明书中所定义。在生理条件下，该荧光探针的水分散液没有荧光，但该荧光探针可以选择性地和白蛋白结合，荧光恢复，整个过程仅需5分钟，且其结合物可稳定存在，绝大多数蛋白质不干扰少数特定蛋白质的检测，生物介质背景干扰小，可用荧光分光光度计进行直接检测。该检测方法条件温和，反应迅速，灵敏度高。

技术领域

本发明涉及一种检测白蛋白的方法，属于蛋白质的生物检测技术领域。

背景技术

蛋白质是生命的物质基础，许多疾病及衰老等生物过程与蛋白质有着密切的关系，因此蛋白质的测定在生命科学、生物化学、临床医学中具有重要意义。近些年来发展了很多蛋白质分析方法，包括共振光散射技术、荧光光度法和紫外分光光度法，其中荧光分析法以其高选择性和高灵敏度的优势备受关注。这些荧光分析方法基于探针和蛋白质的结合方式分为共价结合和非共价键结合，所用探针多为小分子有机荧光探针，这些探针通常具备对蛋白质种类不具备选择性，通常用于检测总蛋白，而难以实现特定蛋白质的检测。

发明内容

本发明针对小分子荧光探针检测蛋白质的选择性问题，提出一种非共价结合且具备较好选择性的解决方案及所需荧光探针，以用于特定蛋白质的快速检测。

本发明所采用的技术方案具体如下：

一种检测白蛋白的方法，包括以下步骤：

(1)向含白蛋白的样品中，加入式(I)所示结构的荧光探针，在温度为20-37℃条件下，培养20分钟以上；

(2)检测步骤(1)获得的培养液的黄色荧光强度；

其中，R₁-R₃独立地选自C_1-10烷基，R₄-R₈独立地选自H或C_1-10烷基。

优选地：

本发明使用的荧光探针的结构为：

所述的白蛋白为人血清白蛋白或牛血清白蛋白。

培养液的pH值为2-4或7-9。

培养液的pH值为8。

培养液中荧光探针的浓度为5μM-60μM。

步骤(2)中，激发波长为572nm，发射波长为586nm。

本发明所采用的荧光探针具有较强的疏水性，在有机溶剂中具有强荧光，在水溶液中不能溶解，几乎没有荧光。在生理条件下，该荧光探针的水分散液没有荧光，但该荧光探针可以选择性地和某些蛋白质结合，荧光恢复，整个过程仅需5分钟，且其结合物可稳定存在，具体原理尚不明确。该检测方法简单，无需复杂的共价标记过程，适用于检测能与该荧光探针发生作用的少数几种蛋白质。

本发明具有以下优点和有益效果：

1.本发明采用的荧光探针与特定蛋白质在反应前后荧光强度变化显著，灵敏性高，且不易受生物体中其他常见蛋白质的干扰。

2.该检测方法简单，反应迅速，条件温和。

附图说明

图1为荧光探针TMSHOB与牛血清白蛋白的反应随时间增加荧光强度的变化图。

图2为荧光探针TMSHOB与不同浓度的牛血清白蛋白在20mM磷酸缓冲溶液(pH＝7.4)中反应后的荧光光谱图，荧光强度随牛血清白蛋白的浓度增大而增强。