[发明专利]一种含氧五元环的海松烷二萜类化合物、制备方法及其应用

权利要求书

1.一种含氧五元环的海松烷二萜类化合物，其特征在于：其化学结构如式(Ⅰ)所示：

2.一种权利要求1所述的含氧五元环的海松烷二萜类化合物的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

制备总粗提物：

1)从平板上挑取少量保藏号为CCTCC NO：M 2013144的Eutypella sp.D-1的菌株的菌丝体，接种到250mL三角瓶中进行种子培养，每个三角瓶装100mL的种子培养基，28℃摇床恒温培养，转速180r/min，培养3.5天获得一级种子液，按照5％v/v接种量接入相同种子培养基，于28℃、180r/min摇床培养3.5d，获得新鲜二级种子液，用于发酵培养；然后将种子培养液接种到2000mL的锥形瓶中进行扩大培养，每个锥形瓶装400mL的发酵培养基，按照5％v/v的接种量接入新鲜二级种子液，置于20℃、180r/min摇床培养10d；当发酵培养至72h、96h、120h时，等量添加乙醇，添加终浓度为4％；

2)将步骤1)中培养得到的菌液过滤，分别获得菌丝体和菌液，菌液用等体积乙酸乙酯萃取3次，合并萃取液蒸干溶剂；将菌丝体用二氯甲烷：甲醇＝1:1超声提取3次，浓缩提取液至有机溶剂挥干，加水混悬，用等体积乙酸乙酯萃取3次，最后合并菌液、菌丝体所得浸膏，得总粗提物50g；

所述种子培养基配方为：葡萄糖125g/L，硝酸钠3.3g/L，三水磷酸氢二钾0.07g/L，七水硫酸镁0.4g/L，氯化钾0.625g/L，酵母提取物0.7g/L，六水氯化钴3.125mg/L，硫酸亚铁18.75mg/L，无水氯化钙6.5g/L，L-鸟氨酸盐酸盐15g/L；

所述发酵培养基配方为：蔗糖51.4g/L，硝酸钠3.3g/L，尿素2.5g/L，酵母提取物0.7g/L，三水磷酸氢二钾0.07g/L，七水硫酸镁0.4g/L，氯化钾0.625g/L，七水硫酸亚铁18.75mg/L，无水氯化钙6.5g/L，六水氯化钴3.125mg/L；

所述总粗提物的分离纯化包括以下步骤：

1)将总粗提物溶于乙酸乙酯中，经减压液相柱色谱，以石油醚:乙酸乙酯＝60:1，50:1，40:1，30:1，20:1，15:1，10:1，5:1，3:1，1:1，0:1为溶剂进行梯度洗脱，根据TLC薄层层析显色合并相似流分，得到12个组分Fr.A-L；

2)对组分Fr.H进行反相中压液相色谱，进行梯度洗脱，条件为70％-100％甲醇/水，流速8mL/min，洗脱4h，根据TLC薄层层析显色合并相似流分，得到9个组分Fr.H1-H9；对组分Fr.H2进行正相硅胶柱色谱，最后经反相高效液相，条件为60％乙腈/水，流速2mL/min，检测波长为252nm，保留时间为37.0分钟，得到所述含氧五元环的海松烷二萜类化合物eutypellenone E。

3.一种如权利要求1所述的含氧五元环的海松烷二萜类化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。

4.根据权利要求3所述的含氧五元环的海松烷二萜类化合物在制备抗肿瘤药物中的应用，其特征在于：所述肿瘤为乳腺癌、结肠癌、慢性白血病、胰腺癌。