[发明专利]一种基于SRAP标记鉴定蝴蝶兰品种的方法

说明书

本发明公开了一种基于SRAP标记鉴定蝴蝶兰品种的方法，包括以下步骤：提取蝴蝶兰基因组DNA；利用SRAP引物组合，以蝴蝶兰基因组DNA为模板进行PCR扩增；将扩增后的DNA片段，利用14g·L^‑1的琼脂糖凝胶电泳检测SRAP扩增产物；对电泳结果进行分析，进而鉴定蝴蝶兰品种；所述SRAP引物组合中的正向引物选自me1‑me10(SEQ ID No.1‑10)，反向引物选自em1‑em10(SEQ ID No.11‑20)。本发明的优点在于：本发明提供的方法，一次性将多种蝴蝶兰品种鉴定处理，简单高效；本发明提供的方法，引物用量更少，仅需0.4μmol·L‑1。

技术领域

本发明属于农业领域，具体地涉及一种基于SRAP标记鉴定蝴蝶兰品种的方法。

背景技术

蝴蝶兰(Phalaenopsis aphrodite Rchb.F.)为兰科蝴蝶兰属，原产于亚热带雨林地区，为附生性兰花。蝴蝶兰白色粗大的气根露在叶片周围，除了具有吸收空气中养分的作用外，还有生长和光合作用。新春时节，蝴蝶兰植株从叶腋中抽出长长的花梗，并且开出形如蝴蝶飞舞般的花朵，深受花迷们的青睐，素有“洋兰王后”之称。种类繁多，仅靠传统鉴定的方法是很难提供可靠证据的。

随着生物技术的发展及其在作物育种中应用的不断深入，科学家们提出了应用分子标记技术进行农作物品种的遗传和真实性鉴定。SRAP操作简便，使用长17-18bp的引物以及50℃的退火温度，保证了结果的稳定性。通过改变SRAP引物3’端3个选择碱基可得到更多的引物，由于上游与下游引物可自由组配，因此用少数的引物可进行多种组合，大大减少了合成引物的费用，同时也提高了引物的使用率。SRAP操作简便、扩增结果稳定、高效、重复性好等优点，已经被应用于图谱构建、比较基因组学、遗传多样性分析和标定基因的研究中。

迄今为止，虽然已经有人将SRAP标记应用在蝴蝶兰亲缘关系分析上，但是尚未见应用SRAP标记一次性进行多种蝴蝶兰品种鉴定的报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于克服现有SRAP标记不能一次性将多种蝴蝶兰品种鉴定，而开发了一种快速、简便且高效地基于SRAP标记鉴定蝴蝶兰品种的方法。

本发明的目的是提供一种基于SRAP标记鉴定蝴蝶兰品种的方法。

本发明的技术方案如下：

一种基于SRAP标记鉴定蝴蝶兰品种的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)提取蝴蝶兰基因组DNA；

(2)利用SRAP引物组合，以蝴蝶兰基因组DNA为模板进行PCR扩增；

(3)将扩增后的DNA片段，利用14g·L^-1的琼脂糖凝胶电泳检测SRAP扩增产物；

(4)对电泳结果进行分析，进而鉴定蝴蝶兰品种；

所述SRAP引物组合中的正向引物选自me1-me10(SEQ ID No.1-10)，反向引物选自em1-em10(SEQ ID No.11-20)。

优选的，所述SRAP引物组合中的正向引物为me1(SEQ ID No.1)。

进一步优选的，所述SRAP引物组合中的反向引物为em1(SEQ ID No.11)。

进一步优选的，所述SRAP引物组合中的反向引物为em10(SEQ ID No.20)。