[发明专利]用于阔叶山麦冬鉴别的特异性分子标记LPMI001

说明书

本发明公开了用于阔叶山麦冬鉴别的特异性分子标记LPMI001。本分子标记LPMI001的上游引物LPGMI001‑F核苷酸序列如SEQ.ID No1所示，下游引物LPMI001‑R核苷酸序列如SEQ.ID No2所示；所述标记在阔叶山麦冬个体中扩增所得特异性条带核苷酸序列如SEQ.ID No3所示。本特异性分子标记LPMI001可用于阔叶山麦冬的鉴定检测，同样可用于麦冬药材的检测，进而规范麦冬药材市场，检测掺假行为，保证麦冬药材安全；此外本特异性分子标记可用于麦冬种苗的检测，对于保证种苗纯度，提高生产效率，具有很大的应用潜力和较好的经济价值。

技术领域

本发明属于药用植物分子鉴定技术领域，具体涉及到一种用于阔叶山麦冬鉴别的特异性分子标记LPMI001。

背景技术

麦冬始载于《神农本草经》，列为上品，具有养阴生津、润肺清心的功效，属常用的滋阴药材。现代药理研究表明山麦冬功效与麦冬相似，均具有增强免疫力、抗心肌缺血和梗塞、降血糖和抗肿瘤等作用，但在主治、用法用量等方面有一定的差别。中国人民共和国药典(2015年版)以百合科山麦冬属植物湖北麦冬Liriope spicata(Thunb.)Lour.Var.prolifera Y.T.Ma或者短葶山麦冬Liriope muscari(Decne.)Baily的干燥块根为正品山麦冬(LIRIOPES RADIX)收载；以沿阶草属植物麦冬Ophiopogon japonicas(L.F)Ker-Gawl.的干燥块根为正品麦冬(OPHIOPOGOMIS RADIX)收载。阔叶山麦冬(Liriopeplatyphylla Wang et Tang)同属于山麦冬属，阔叶山麦冬植株外形和普通麦冬容易区别，但是阔叶山麦冬的块根与正品麦冬极为相似，常作为商品麦冬在市场流通，因此有必要对其进行鉴定以与正品麦冬相区别，以保证麦冬药材的用药安全。截止本发明，虽然有从形态标记、生理生化、细胞显微切片和RAPD标记等多方面关于阔叶山麦冬鉴别的研究报道，但均未找到一种准确高效的阔叶山麦冬鉴别方法。

发明内容

本发明的一个目的是为了改善上述问题，提供一种用于阔叶山麦冬鉴别的特异性分子标记LPMI001。

本发明开发了一种鉴别阔叶山麦冬的特异性分子标记引物，其特征在于该引物核苷酸序列如下：

上游引物LPMI001-F：5’-CGGTGGGTTGCTAAGACTGTA-3’，如SEQ.ID No1所示；

下游引物LPMI001-R：5’-GGTTTCTTGCCAACATGGGTA-3’，如SEQ.ID No2所示。

此对特异性分子标记引物是采用普通PCR技术，利用微卫星标记对普通麦冬、山麦冬和阔叶山麦冬等植株样品DNA进行扩增，对扩增产物进行电泳，筛选阔叶山麦冬特异性条带进行测序，然后对测序获得的阔叶山麦冬特异条带序列进行比对，并以此设计特异性引物(LPMI001-F/R)。该引物对具有极高的专一性，用此对引物对普通麦冬、山麦冬和阔叶山麦冬等植株进行PCR扩增，只有阔叶山麦冬能获得1893bp的DNA条带，而普通麦冬和其他山麦冬没有；阔叶山麦冬扩增得到的特异片段核苷酸序列如SEQ.ID No3所示。

本发明的另一个目的是提供利用上述特异性分子标记引物对普通麦冬、山麦冬和阔叶山麦冬进行快速鉴定的方法。

本发明采用上述特异性分子标记引物(LPMI001-F/R)作为特异性扩增引物，以待普通麦冬、山麦冬和阔叶山麦冬样本基因组DNA为模板，进行PCR扩增，对扩增产物进行电泳检测，若电泳结果出现一条1893bp的DNA条带，则待测样本为阔叶山麦冬；若电泳结果未出现一条1893bp的DNA条带，则待测样本为普通麦冬和山麦冬。

上述方法中扩增引物的选择、基因组DNA的提取确定，以及电泳检测，这些步骤均可按照本领域常规方法进行。