[发明专利]一种采用电化学免疫传感器检测S-层蛋白的方法

权利要求书

1.一种采用电化学免疫传感器检测S-层蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1)制备修饰有聚多巴胺和S-层蛋白单克隆抗体的复合电化学免疫传感器；

步骤2)标准溶液的配制：配制含有S-层蛋白的磷酸缓冲溶液，作为标准溶液，将含有浓度为0的S-层蛋白的标准溶液作为空白标样；

步骤3)S-层蛋白测定方法的建立：将步骤1)制备的复合电化学免疫传感器浸入步骤2)所述含有S-层蛋白的标准溶液中孵育，孵育后用磷酸缓冲溶液冲洗电化学免疫传感器，在K₃[Fe(CN)₆]溶液中进行差分脉冲伏安扫描，记录其响应电流；以孵育前后响应电流的变化值ΔI对S-层蛋白浓度的对数值lgC作图得ΔI-lgC工作曲线，采用线性回归法得到ΔI-lgC线性回归方程，实现对S-层蛋白的定量检测；

步骤4)S-层蛋白的测定：配置含待测样品的磷酸缓冲溶液，加入步骤2)所述标准溶液，测定其响应电流，采用标准加入法计算出待测样品中S-层蛋白的浓度。

2.根据权利要求1所述的一种采用电化学免疫传感器检测S-层蛋白的方法，其特征在于，步骤1)所述复合电化学免疫传感器为石墨烯-壳聚糖/聚多巴胺/S-层蛋白单克隆抗体修饰的复合电化学免疫传感器，其制备方法如下：先在预处理过的玻碳电极表面修饰石墨烯-壳聚糖复合物，晾干后将其浸入聚多巴胺溶液中，最后在电极表面修饰S-层蛋白单克隆抗体，制得所述复合电化学免疫传感器。

3.根据权利要求1所述的一种采用电化学免疫传感器检测S-层蛋白的方法，其特征在于，步骤1)所述复合电化学免疫传感器为纳米金/聚多巴胺/S-层蛋白单克隆抗体修饰的复合电化学免疫传感器，其制备方法如下：先将纳米金颗粒通过电化学还原法沉积到预处理过的玻碳电极表面，待电极晾干后将其浸入聚多巴胺溶液中，最后在电极表面修饰S-层蛋白单克隆抗体，制得所述复合电化学免疫传感器。

4.根据权利要求1所述的一种采用电化学免疫传感器检测S-层蛋白的方法，其特征在于，以步骤2)所述空白标样的测定值标准偏差的3倍作为样品检测限，重复步骤3)可得出S-层蛋白样品的检测限。

5.根据权利要求1所述的一种采用电化学免疫传感器检测S-层蛋白的方法，其特征在于，步骤4)所述测定方法如下：配置含有待测样品的磷酸缓冲溶液作为待测试样溶液，分取5份等量的待测试样溶液，加入步骤2)所述标准溶液，然后稀释至相同的体积，设定一个浓度C_t作为标准量，使加入的标准溶液的浓度分别为0，C_t、2C_t、3C_t、4C_t，再在上述实验条件下，分别测定待测试样溶液的电流，外延曲线与横坐标相交，交点至原点的距离所相应的浓度C_x，最后可计算出待测样品中S-层蛋白的浓度。