[发明专利]一种测定复杂生物体系中CE2活性的检测试剂盒

权利要求书

1.一种测定复杂生物体系中CE2活性的检测试剂盒，包括A液、B液和C液，均为独立包装，所述试剂A液为羧酸酯酶2的特异性探针底物N-正丁基-4-（2-氯-N-甲基乙酰胺）-1,8-萘酰亚胺（NCEN）溶液；所述试剂B液为100 mM磷酸缓冲盐溶液，pH值为7.4；所述试剂C液为终止液色谱纯乙腈。

2.根据权利要求1所述一种测定复杂生物体系中CE2活性的检测试剂盒的使用方法，其特征是：

样本预处理：生物样本用试剂B液稀释或处理至合适浓度，为操作液；

样本孵育：将操作液在37℃预孵5~10分钟后，再加入所述试剂A液为工作液，37℃孵育30分钟；反应后等工作液体积试剂C液终止反应；将所述反应后的体系涡旋混匀3分钟，20000 g离心10分钟，离心后取上清液;

液相分离：将步骤（2）获得的上清液进行色谱分离，色谱分离条件为：色谱柱：分析型C18柱；流动相：乙腈：含有0.2%的甲酸水溶液;流速：0.1-1.0 mL/min，优选0.4 mL/min;

荧光检测：将液相色谱分离后的底物和产物分别采用荧光检测法检测，底物和产物的最佳激发波长分别为354 nm和430 nm，最佳发射波长分别为432 nm和542 nm;

数据统计：从液相获取探针代谢产物N-正丁基-4-氨基-1,8-萘酰亚胺 的峰面积，通过计算单位时间内N-正丁基-4-氨基-1,8-萘酰亚胺 的生成量进而表征生物样本中羧酸酯酶2的活性。

3.根据权利要求1所述一种测定复杂生物体系中羧酸酯酶2活性的检测试剂盒的使用方法，适用于检测哺乳动物细胞/组织等生物样本中羧酸酯酶2的活性。

4.根据权利要求1所述一种测定复杂生物体系中羧酸酯酶2活性的检测试剂盒的使用方法，适用于羧酸酯酶2抑制剂的筛选及检测。

5.根据权利要求1所述一种测定复杂生物体系中羧酸酯酶2活性的检测试剂盒的使用方法，适用于羧酸酯酶2诱导剂的发现及检测。

6.根据权利要求1所述一种测定复杂生物体系中羧酸酯酶2活性的检测试剂盒的使用方法，适用于羧酸酯酶2-配体相互作用机制研究，包括配体与羧酸酯酶2的结合位点判断。