[发明专利]CD47基因人源化改造动物模型的制备方法及应用

权利要求书

1.一种人源化动物模型构建的方法，其特征在于，所述方法包括导入人CD47基因、使得该人CD47基因在动物细胞中表达并且促进该细胞产生人或人源化CD47蛋白，同时降低或消除了动物体内内源的Cd47基因的表达。

2.根据权利要求1所述的人源化动物模型构建的方法，其特征在于，所述人源化动物模型基因组中包括人源化CD47基因，所述人源化CD47基因编码人源化CD47蛋白的胞外区、跨膜结构域和胞内区，其中所述跨膜结构域和胞内区为动物来源，所述胞外区的全部或部分由人源部分编码，同时该动物来源部分和人源部分通过序列拼接连接于动物模型内源的Cd47启动子后。

3.根据权利要求2所述的人源化动物模型构建的方法，其特征在于，所述人源化CD47蛋白的胞外区包括IgV结构域，所述人源化CD47基因包括动物来源部分和人源部分，所述人源部分编码IgV结构域。

4.根据权利要求3所述的人源化动物模型构建的方法，其特征在于，其中所述动物来源部分包括动物来源Cd47基因的1号外显子全部序列、2号外显子部分序列、3号外显子及其后所有外显子的全部序列；和/或所述人源部分为编码人CD47多肽的氨基酸的第2号外显子的全部或部分序列。

5.根据权利要求1-4任一所述的人源化动物模型构建的方法，其特征在于，使用基因编辑技术进行CD47人源化动物模型的构建，所述基因编辑技术包括基于胚胎干细胞的DNA同源重组技术、CRISPR/Cas9技术、锌指核酸酶技术、转录激活子样效应因子核酸酶技术、归巢核酸内切酶或其他分子生物学技术；优选的，使用基于CRISPR/Cas9的基因编辑技术进行CD47人源化动物的构建。

6.根据权利要求5所述的人源化动物模型构建的方法，其特征在于，将动物来源的Cd47的第2号外显子全部或部分序列替换为人CD47的第2号外显子全部或部分序列，其中，使用sgRNA靶向技术实现上述替换，优选的，所述sgRNA在待改变的非人动物Cd47基因上的靶序列上是唯一的，且符合5’-NNN(20)-NGG3’或5’-CCN-N(20)-3’的序列排列规则，更优选的，所述sgRNA靶向的5’端靶位点序列如SEQ ID NO：1-8任一项所示，3’端靶位点序列如SEQ IDNO：9-17任一项所示。

7.根据权利要求1-6任一所述的人源化动物模型构建的方法，其特征在于，所述动物来源的Cd47基因为非人类哺乳动物来源的Cd47基因；优选的，所述非人类哺乳动物为啮齿类动物；进一步优选的，所述啮齿类动物为小鼠。