[发明专利]一种甘薯中乔治亚曲叶病毒的检测试剂盒及其检测方法在审
| 申请号： | 201810296200.4 | 申请日： | 2018-04-04 |
| 公开（公告）号： | CN108504776A | 公开（公告）日： | 2018-09-07 |
| 发明（设计）人： | 贾云云;褚海侠;赵崇红;郭樊 | 申请（专利权）人： | 贾云云;褚海侠;赵崇红;郭樊 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11 |
| 代理公司： | 广州天河万研知识产权代理事务所(普通合伙) 44418 | 代理人： | 刘强;陈轩 |
| 地址： | 528531 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 甘薯 病毒 检测 检测试剂 试剂盒 特异性引物 待测样品 电泳检测 繁琐步骤 反转录酶 甘薯病毒 合成引物 可重复性 缓冲液 灵敏性 酶反应 脱毒苗 总RNA 核酸 防治 | ||
1.一种甘薯中乔治亚曲叶病毒的检测试剂盒，其特征在于，包括两条特异性引物：
SPLVGV-1：5’-GAATCGTCCTTATCAATGAG-3’；
SPLVGV-2：5’-GCTATCACTATCTGCGACAAG-3’。
2.根据权利要求1所述试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括M-MLV反转录酶、M-MLV酶反应缓冲液、dNTPs、Taq DNA聚合酶、Mg2+和PCR反应缓冲液。
3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括标准阳性模板。
4.一种甘薯中乔治亚曲叶病毒的检测方法，其特征在于，其包括以下步骤：
(1)提取待测样品总RNA；
(2)设计并合成引物；
(3)RT-PCR
a.反转录合成cDNA，以甘薯总RNA为模板，以SPLVGV-2引物，通过反转录酶合成cDNA
b.PCR扩增，以cDNA为模板，以SPLVGV-1和SPLVGV-2为引物，进行PCR反应；
(4)电泳检测
吸取2.5μL RT-PCR产物进行0.8-1.5％的琼脂糖凝胶电泳，经核糖染色Goldview，通过凝胶成像仪观察，在感染该乔治亚曲叶病毒的甘薯样品中有895bp的核酸条带。
5.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，所述步骤(1)中总RNA提取法采用的是多糖多酚植物组织的裂解法。
6.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，所述步骤(3)中PCR扩增阶段的反应条件为：94℃预变性5min；94℃变性1min；54℃退火1min；72℃延伸1min，共进行35个循环，72℃延伸7min，4℃保存。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于贾云云;褚海侠;赵崇红;郭樊，未经贾云云;褚海侠;赵崇红;郭樊许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201810296200.4/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
