[发明专利]基于化感自毒作用的玉米连作障碍修复剂及其应用

权利要求书

1.基于化感自毒作用的玉米连作障碍修复剂及其应用，其特征是：修复剂由栖稻假单胞菌和伯克霍尔德菌按照1:3-3:1比例组成，栖稻假单胞菌在修复剂菌液中浓度为2.0-3.0×10⁸cfu/ml，伯克霍尔德菌在修复剂菌液中的浓度为2.0-3.0×10⁸cfu/ml；

栖稻假单胞菌（Pseudomonas oryzihabitans），保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCC No. 15325，保藏日期为2018年01月29日；该菌株的菌落及菌体特征为：该自毒物质降解菌在NA培养基（酵母浸粉1g；牛肉膏3g；蛋白胨5g；蔗糖10g；琼脂18g；蒸馏水1000ml；121℃灭菌30min）上培养48h后菌落光滑的或皱纹的，边缘整齐或不规则，平凸，淡黄色，30℃培养2d后菌落直径2mm，菌体杆状，鞭毛运动，不产芽孢，革兰氏染色阴性；该菌株生理生化特征为：氧化酶试验阴性、接触酶试验阳性、甲基红试验阴性、淀粉水解试验阴性、明胶水解试验阴性、硝酸盐还原试验阳性、H2S试验阴性、丙二酸盐利用试验阳性、柠檬酸盐利用试验阳性、葡萄糖利用试验阳性、乳糖利用试验阴性、半乳糖利用试验阳性、麦芽糖利用实验阳性；

伯克霍尔德菌（Burkholderia phytofirmans），保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号为CGMCC No. 15326，菌株编号为20180101辽CK1，保藏日期为2018年1月29日；该菌株的菌落及菌体特征为：该自毒物质降解菌在NA培养基（酵母浸粉1g；牛肉膏3g；蛋白胨5g；蔗糖10g；琼脂18g；蒸馏水1000ml；121℃灭菌30min）上培养48h后菌落成白、圆形、表面光滑、隆起、边缘整齐、直径2~4mm，菌体杆状，丛生鞭毛，革兰氏染色阴性，不产芽孢；该菌株生理生化特征为：氧化酶试验阴性或阳性、接触酶试验阴性或阳性、淀粉水解试验阴性、明胶液化试验阳性，硝酸盐还原试验阳性、柠檬酸盐利用试验阳性、丙二酸盐利用试验阳性、H2S试验阳性、甲基红试验阳性、葡萄糖利用试验阳性、蔗糖利用试验阳性、麦芽糖利用试验阴性；

栖稻假单胞菌菌株的最适宜培养基为LB培养基，配方包括胰蛋白胨10g/L、酵母提取物5g/L、氯化钠（NaCl）10g/L，接种量为培养基重量的2%，发酵温度为28℃，搅拌速度为120rpm，发酵时间为5天；

伯克霍尔德菌菌株的最适宜培养基为LB培养基，配方包括胰蛋白胨10g/L、酵母提取物5g/L、氯化钠（NaCl）10g/L，接种量为培养基重量的2%，发酵温度为28℃，搅拌速度为120rpm，发酵时间为5天。

2.基于化感自毒作用的玉米连作障碍修复剂及其应用，其特征是：修复剂的使用方法：采用种子包衣的方法，播种前将玉米种子用75%乙醇表面消毒30 s，无菌水冲洗 5次，采用5mL/50 g（发酵液体积/种子质量）的比例进行种子处理，即将50 g玉米种子与5mL发酵液搅拌充分混和，静置3-5个小时后播种。