[发明专利]去除慈姑培养过程中内生菌的方法、培养方法以及应用

说明书

本发明公开了一种去除慈姑培养过程中内生菌的方法、培养方法以及应用。该去除慈姑培养过程中内生菌的方法包括：采用硫酸链霉素和氨苄西林组合处理，并将半固体培养基和液体培养基结合进行培养，去除慈姑组织培养过程中的内生菌。该方法具有高效的杀菌、抑菌作用，消除了慈姑组织培养过程中的内生菌，同时避免高浓度抗生素对慈姑产生毒副作用；另外，该方法能够更好地消除内生菌对组培苗产生的生长缓慢、不增殖的影响，可使慈姑组培苗内生菌污染率降低至10％，继代增殖倍数3.5左右，生根率达到90％，能够保证慈姑组培苗正常生长；该方法用于增殖状态中被污染的组培苗处理中，能够彻底消除慈姑组织培养过程中继代增殖和生根时的内生菌，成功解决慈姑组培苗生产过程中内生菌难以去除的瓶颈问题。

技术领域

本发明属于慈姑培养技术领域，具体涉及一种去除慈姑培养过程中内生菌的方法、慈姑的培养方法以及增殖慈姑组培苗的处理方法。

背景技术

慈姑产区种苗均是以传统的球茎留种，品种日益退化，表现为产量逐年降低，品质差，病虫害发生严重，尤其是黑粉病和叶斑病的发生，造成大面积减产。组培苗植株生长整齐健壮、管理方便，且易获优质高产，提高球茎商品性，同时可有效解决种源带病、品种退化等问题。

专利CN10454227B公开了一种慈姑组培苗快速繁殖方法及培养基，方法包括：(1)取慈姑外植体，经脱毒后在固体培养基中培养3周，再接种入间歇浸没式生物反应器中；(2)利用间歇浸没式培养方法；其中，步骤(1)中所述的慈姑外植体的脱毒方法为：将慈姑外植体浸没于含洗衣粉水中，冲洗30min，晾干后，用75％乙醇30s，0.1％升汞10min消毒，后用无菌水冲洗3～5次。该专利文献仅仅公开了一种如何快速繁殖慈姑组培苗的方法，该方法在固体培养前先进行脱毒，先固体培养后放入间歇浸没液体培养，前期的固体培养内生菌污染率较高，无法供给充足的培养材料，没有在培养过程中没有对产生的内生菌进行处理。

慈姑为水生植物，从植株生长到球茎发育都是在水中，易受到微生物的侵染，继代增殖2-3次仍然出现内生菌污染，污染率可达40％以上。因此，去除慈姑组织培养(组培)生产过程中内生菌，去除内生菌的污染，对实现慈姑组培苗工厂化生产和后期优质种苗的提供具有重要现实意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种去除慈姑培养过程中内生菌的方法、慈姑的培养方法以及增殖慈姑组培苗的处理方法，其彻底消除了内生菌在慈姑组织培养中的污染问题，慈姑的污染率低、增殖率高。

为实现上述目的，在本发明的一个实施方案中，本发明提供了一种去除慈姑培养过程中内生菌的方法，该方法包括：采用硫酸链霉素和氨苄西林组合处理，并将半固体培养基和液体培养基结合进行培养，去除慈姑组织培养过程中的内生菌。

在本发明的一个优选实施方案中，本发明提供了一种去除慈姑培养过程中内生菌的方法，所述硫酸链霉素和氨苄西林组合处理时采用的是硫酸链霉素溶液和氨苄西林溶液；其中所述硫酸链霉素溶液的配制方法包括：称取50mg～400mg的粉状硫酸链霉素，溶于无水乙醇中，最后定容至1L，制得浓度为50mg/L～400mg/L的硫酸链霉素溶液；所述氨苄西林溶液的配制方法包括：称取50mg～400mg的粉状氨苄西林，溶于水中，最后定容至1L，制得浓度为50mg/L～400mg/L的氨苄西林溶液。

在本发明的一个优选实施方案中，本发明提供了一种去除慈姑培养过程中内生菌的方法，所述硫酸链霉素溶液的浓度为100mg/L～200mg/L；所述氨苄西林的浓度为100mg/L～150mg/L。

在本发明的一个优选实施方案中，本发明提供了一种去除慈姑培养过程中内生菌的方法，所述半固体培养基包括：MS+1～3mg/L的6-BA+0.01～0.05mg/L的NAA+3.5g/L的卡拉胶+20～30g/L的蔗糖，每瓶含有20～30ml培养基。