[发明专利]一种提高小单孢菌生产能力的培养方法在审
| 申请号： | 201810297884.X | 申请日： | 2018-03-30 |
| 公开（公告）号： | CN108486014A | 公开（公告）日： | 2018-09-04 |
| 发明（设计）人： | 黄凤珠;周兵兵;王为民;龚振宝;吴美蓉;巫秋萍 | 申请（专利权）人： | 丽珠集团福州福兴医药有限公司 |
| 主分类号： | C12N1/20 | 分类号： | C12N1/20;C12R1/29 |
| 代理公司： | 福州市博深专利事务所(普通合伙) 35214 | 代理人： | 林志峥 |
| 地址： | 350300 福*** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 小单孢菌 菌液 斜面培养基 发酵培养 斜面培养 种子培养 生产能力 菌落 种子培养基培养 发酵培养基 工业微生物 培养基配方 种子培养基 分离纯化 菌落接种 菌液接种 单菌落 效价 摇瓶 接种 验证 改进 | ||
1.一种提高小单孢菌生产能力的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1：将分离纯化培养得到的小单孢菌单菌落接种至斜面培养基，培养11d，得到第一菌落；所述斜面培养基由以下配方配置而成：
可溶性淀粉7.0-8.0g/L；氯化钠0.3-0.7g/L；磷酸二氢钾0.2-0.4g/L；硝酸钠0.8-1.2g/L；碳酸钙0.8-1.2g/L；琼脂粉15-19g/L；
步骤2：将经过斜面培养基培养制得的第一菌落接种至种子培养基，培养40h，得到第一菌液；所述种子培养基由以下配方配置而成：
玉米淀粉8.0-12.0g/L；硝酸钠0.3-0.7g/L；黄豆饼粉8.0-12.0g/L；大豆蛋白胨1.0-3.0g/L；葡萄糖0.8-1.2g/L；碳酸钙5.0-7.0g/L；
步骤3：将经过种子培养基培养制得的第一菌液接种至发酵培养基，培养120h，得到第二菌液，所述第二菌液为具有高生产能力的小单孢菌；所述发酵培养基由以下配方配置而成：
玉米淀粉53.0-57.0g/L；硝酸钠0.8-1.2g/L；黄豆饼粉33.0-37.0g/L；大豆蛋白胨6.3-6.7g/L；葡萄糖0.8-1.2g/L；碳酸钙6.3-6.7g/L。
2.根据权利要求1所述的提高小单孢菌生产能力的培养方法，其特征在于，所述步骤1中的分离纯化培养方法为：将小单孢菌种接种至分离纯化培养基中，培养13d，得到直径为4-6mm，高度为3-4mm的小单孢菌单菌落；所述分离纯化培养基由以下配方配置而成：
可溶性淀粉7.5g/L；氯化钠0.5g/L；磷酸二氢钾0.3g/L；硝酸钠1.0g/L；碳酸钙1.0g/L；琼脂粉17g/L。
3.根据权利要求1所述的提高小单孢菌生产能力的培养方法，其特征在于，所述步骤1中的斜面培养基培养温度为35.9-37.9℃，pH值为7.0-7.2。
4.根据权利要求2所述的提高小单孢菌生产能力的培养方法，其特征在于，所述步骤1中，分离纯化培养基的培养温度为35.9-37.9℃，pH值为7.0-7.2。
5.根据权利要求1所述的提高小单孢菌生产能力的方法，其特征在于，所述步骤2中，种子培养基的培养温度为33.5-35.5℃，pH值为7.0-7.2，培养转速为220rpm。
6.根据权利要求1所述的提高小单孢菌生产能力的培养方法，其特征在于，所述步骤3中，发酵培养基的培养温度为33.5-35.5℃，所述发酵培养基的pH值为7.0-7.2，培养转速为220rpm。
7.根据权利要求1所述的提高小单孢菌生产能力的培养方法，其特征在于，所述斜面培养基由以下配方配置而成：
可溶性淀粉7.5g/L；氯化钠0.5g/L；磷酸二氢钾0.3g/L；硝酸钠1.0g/L；碳酸钙1.0g/L；琼脂粉17g/L。
8.根据权利要求1所述的提高小单孢菌生产能力的培养方法，其特征在于，所述种子培养基由以下配方配置而成：
玉米淀粉10.0g/L；硝酸钠0.5g/L；黄豆饼粉10.0g/L；大豆蛋白胨2.0g/L；葡萄糖1.0g/L；碳酸钙6.0g/L。
9.根据权利要求1所述的提高小单孢菌生产能力的培养方法，其特征在于，所述发酵培养基由以下配方配置而成：
玉米淀粉55.0g/L；硝酸钠1.0g/L；黄豆饼粉35.0g/L；大豆蛋白胨6.5g/L；葡萄糖1.0g/L；碳酸钙6.5g/L。
10.根据权利要求1所述的提高小单孢菌生产能力的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1：将分离纯化培养得到的小单孢菌单菌落接种至斜面培养基，培养11d，得到第一菌落；所述斜面培养基由以下配方配置而成：
可溶性淀粉7.5g/L；氯化钠0.5g/L；磷酸二氢钾0.3g/L；硝酸钠1.0g/L；碳酸钙1.0g/L；琼脂粉17g/L；
所述分离纯化培养方法为：将小单孢菌种接种至分离纯化培养基中，培养13d，得到直径为4-6mm，高度为3-4mm的小单孢菌单菌落；所述分离纯化培养基由以下配方配置而成：
可溶性淀粉7.5g/L；氯化钠0.5g/L；磷酸二氢钾0.3g/L；硝酸钠1.0g/L；碳酸钙1.0g/L；琼脂粉17g/L；
所述斜面培养基培养温度为36.9℃，pH值为7.1；
步骤2：将经过斜面培养基培养制得的第一菌落接种至种子培养基，培养40h，得到第一菌液；所述种子培养基由以下配方配置而成：
玉米淀粉10.0g/L；硝酸钠0.5g/L；黄豆饼粉10.0g/L；大豆蛋白胨2.0g/L；葡萄糖1.0g/L；碳酸钙6.0g/L；
所述种子培养基的培养温度为34.5℃，pH值为7.1，培养转速为220rpm；
步骤3：将经过种子培养基培养制得的第一菌液接种至发酵培养基，培养120h，得到第二菌液，所述第二菌液为具有高生产能力的小单孢菌；所述发酵培养基由以下配方配置而成：
玉米淀粉55.0g/L；硝酸钠1.0g/L；黄豆饼粉35.0g/L；大豆蛋白胨6.5g/L；葡萄糖1.0g/L；碳酸钙6.5g/L；
所述发酵培养基的培养温度为34.5℃，所述发酵培养基的pH值为7.1，培养转速为220rpm。
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