[发明专利]一种高灵敏的乳酸测定方法及乳酸检测试剂盒

说明书

本发明涉及一种高灵敏度测定乳酸的方法，同时本发明还涉及乳酸检测试剂盒，属于医学检验、乳酸菌发酵食品测定技术领域。乳酸检测试剂是用于高原反应、运动员训练、重症糖尿病，以及其它原因引起的机体酸中毒时的重要检测指标，也是乳酸发酵食品检测的一项指标。本方法是用原乳酸氧化酶法，另外再引入丙酮酸氧化酶，使一分子的乳酸经过乳酸氧化酶和丙酮酸氧化酶反应，能生成两分子的过氧化氢，再经Trinder反应生成红色，在波长500～600nm下检测吸光度，计算出乳酸的含量。该方法灵敏度高，重复性好，线性宽，稳定性好，很实用于常规实验室应用。

技术领域

本发明涉及一种测定乳酸的方法，同时本发明还涉及乳酸检测试剂盒，属于医学检验、乳酸菌发酵食品类测定技术领域。

背景技术

乳酸是葡萄糖的无氧酵解产生丙酮酸，丙酮酸再被还原所得，是糖代谢的中间产物，主要来源于骨骼肌、脑、皮肤、肾髓质和红细胞。血液中乳酸浓度和这些组织产生乳酸的速度以及肝脏对乳酸的代谢速度有关，约65％的乳酸由肝脏代谢。测定血浆中的乳酸浓度对乳酸性酸中毒有重要的诊断意义。

在高原缺氧时，机体血糖产生无氧酵解，生成大量的乳酸，使组织产生一系列酸中毒病症状，此时检测血液乳酸的含量，是诊断酸中毒的一个重要指标。

剧烈运动或脱水时血液乳酸会迅速升高，因此检测血液乳酸是监护、检测运动员训练强度的指标，作为衡量运动员抗缺氧能力、耐疲劳训练及体力恢复等方面的重要数据。

在病理情况下，如休克、心力衰竭、血液病和肺功能不全时出现组织严重缺氧，导致丙酮酸还原成乳酸的酵解作用增加，促使乳酸水平升高。某些肝脏疾病时由于肝脏对乳酸的清除率减低，可出现乳酸升高。糖尿病患者胰岛素绝对或相对不足，机体不能有效利用血糖，丙酮酸大量还原成乳酸，导致体内乳酸堆积，出现乳酸酸中毒。服用大量甲醇、乙醇、水杨酸等，可引起血液乳酸增高。

在食品工业中，由乳酸菌发酵的食品，需要检测乳酸的浓度，也要用到检测试剂。

乳酸的测定有化学法、气相色谱法、电化学法、酶电极感应法和酶催化法。化学法操作复杂，时间长，准确性差；气相色谱法准确性好，样本用量少，但需要气相色谱仪不能用于常规试验室；电化学法灵敏度高，线性范围宽，快速、简便、准确，但需要专用设备；现在酶法应用最为普遍，酶催化法灵敏度高，线性范围宽，且适用于自动化分析仪，是乳酸测定最理想的常规方法。

根据反应原理不同，酶法可分为乳酸脱氢酶法和乳酸氧化酶法。

乳酸脱氢酶法：

用340nm波长检测还原性辅酶的生成量，计算出乳酸的含量；

乳酸氧化酶法：

用波长500～600nm波长检测吸光度，求出乳酸的浓度。

乳酸氧化酶法比乳酸脱氢酶试剂稳定，灵敏度高，重复性好，线性范围宽。

发明内容

正常情况下，血浆中的乳酸含量很低，在0.60～0.17mmol/L，目前现有的方法学在检测低值情况下往往灵敏度低，重复性差，特别是做质控时变异系数大。本发明是在原来乳酸氧化酶法的基础上，又增加了一个丙酮酸氧化酶，能使一分子的乳酸氧化后产生两分子的氧，增加了吸光度，起到了放大作用。这样就充分提高了灵敏度和重复性。

本发明高灵敏的乳酸氧化酶法的反应原理：

反应分两步进行

第一步，先在试剂一中加入丙酮酸氧化酶和过氧化物酶，氧化分解掉血样中原有的丙酮酸及反应所产生的氧；