[发明专利]细胞样本的细胞计数分析方法

说明书

细胞样本的细胞计数分析方法。本发明涉及借助用于显微检查多个细胞样本的显微镜来细胞计数分析多个细胞样本的方法，其中显微镜可以或优选选择性地和/或交替地以透射模式和/或荧光模式、尤其落射荧光模式操作，并且至少一个细胞样本具有至少一个荧光标记。尤其该方法中规定，在透射模式下记录的图像中检测细胞样本的细胞或细胞组分的位置和/或轮廓，并然后根据细胞样本中细胞或细胞组分的检测到的位置和/或轮廓分析在荧光模式下记录的图像的检测到的强度，和/或在荧光模式的图像中检测细胞样本的细胞或细胞组分的位置和/或轮廓，并然后根据细胞样本中细胞或细胞组分的检测到的位置和/或轮廓分析在透射模式下记录的图像的检测到的强度。

技术领域

本发明涉及用于多个细胞样本的细胞计数(cytometric)分析的方法。

背景技术

例如，用于荧光染色细胞的基于图像的分析的细胞计数分析方法在细胞计数法领域是已知的，其中，除了经典细胞计数法中已知的基于图像的细胞计数法的参数或相应特征之外，可用参数或相应特征的数目加倍，因为(可能通过荧光显微镜)在显微镜下记录的细胞样本的相应图像的目标大小(尤其是细胞大小)和其它形态学参数是遵循经典计数法中已知的参数(通常是颜色(或相应波长)、强度和散射光信号)获得的。

现有技术中已知其它方法，借助于这些方法，使用成像和非成像方法来检查样本(诸如组织样本或细胞培养物)的荧光性质。各种方法还使得能够确定个体生物细胞和细胞组分的荧光强度。借助成像时间延迟积分检测器(TDI检测器)(如在US6211955B1中所描述的)，或者借助脉动照射(如在US 5247339中所描述的)，或者通过用激光束扫描样本，例如在流式细胞计数器中或在成像流式细胞计数器中对荧光强度进行定量。

此外，已知流式细胞计数法是一种用于细胞的定量荧光分析的方法。在流式细胞计数法中，使聚焦激光束穿过(染色的)细胞悬液，其中，检测到以这种方式产生的散射光和荧光。在测量期间，个体荧光标记的细胞通过毛细管进行传送，其中，个体细胞流过流动池(flow cell)，在流动池中这些个体细胞被激光激发。细胞中的荧光染料(fluorescentdye)被激光束激发，其结果是，细胞散射激光。在这样做时，检测到光散射和发射的荧光。

用于定量荧光分析的其它方法利用常规落射荧光(epifluorescence)显微镜结合数字成像和随后的图像分析进行荧光定量。在这些方法中使用样本和样本载体，以便可以在诸如微量滴定板(“孔板”)的培养容器中直接分析例如贴壁细胞。

DE 10 2011 075 369 A1描述了一种用于高速记录目标的横向相邻区域的个体图像的方法以及一种用于在连续图像记录周期期间记录目标的个体图像以及后续将个体图像合成为完整的目标图像的显微镜。

出于科学研究和质量控制的目的以及分别针对毒理学或诊断学，已知将细胞加入到液体细胞固定溶液或液体缓冲液中，以对细胞培养物中的荧光样本进行定量，其中，细胞通常在检查过程期间被液体覆盖。

在显微镜检查中，将细胞样本布置在台上的作为样本载体的显微镜板(微量滴定板；孔板)上，其中，台连同样本载体一起从一个位置传送到下一个位置，并且停下来记录图像。然后，样本载体进一步移动。由于样本载体的抖动，待研究的细胞受到加速力和振动的作用，这会引起细胞培养物的变化并且还产生表面波，因此妨碍了透射图像的记录。

另选地，为了防止待研究的样本上的振荡，显微镜的整个光学系统或光学器件的部分相对于样本载体移动，由此因所讨论的显微镜的组件的重量重，难以进行快速移动。

发明内容

本发明的目的包括改进细胞样本的荧光定量，其中，应该减少细胞样本(尤其是贴壁细胞)的负荷(尤其是机械负荷)和曝光，其中，应该有可能尤其对贴壁细胞执行更快的分析。