[发明专利]一种杏鲍菇免疫蛋白的提取方法及应用

说明书

本发明涉及一种杏鲍菇免疫蛋白的提取方法，取新鲜杏鲍菇，去除柄部后，进行清洗、切片，再进行真空冷冻干燥，将冻干的杏鲍菇粉碎后过200目筛，得到杏鲍菇粉；以1:15‑25的料液比往杏鲍菇粉中加入乙酸水溶液，搅拌提取20‑30h，然后采用60‑80％梯度硫酸铵沉淀法，得到杏鲍菇粗蛋白；取杏鲍菇粗蛋白用去离子水配制杏鲍菇粗蛋白的水溶液，上DEAE‑纤维素柱，分别以0、0.1、0.3、0.5mol/L NaCl溶液进行梯度洗脱，收集0.3mol/L NaCl洗脱得到的组分,进行透析，最后冷冻干燥，即得。本发明提取工艺简单，条件温和，制得的杏鲍菇免疫蛋白纯度高，抗炎活性强，特别适用于结肠癌的治疗。

技术领域

本发明涉及一种杏鲍菇免疫蛋白的提取方法，属于蛋白提取技术领域。

背景技术

目前，癌症是死亡率非常高的疾病。结肠癌为常见的消化道恶性肿瘤，在世界范围内，结肠癌死亡率一直居高不下。化疗是抑制结肠癌的主要手段，但效果有限且副作用强。平衡的免疫系统能够维持机体组织内环境的稳态,当组织内环境稳态受到干扰时，会引发免疫反应。失调的免疫反应，如组成性活化形式的先天免疫反应则会导致致肿瘤性。研究发现，调节小鼠的免疫反应，能影响机体的血管生成、细胞增殖及癌症发病率。因此，开发具有高效、低毒性的新型抗癌物，对于预防和抑制结肠癌具有重要意义。

研究表明,从食用菌中分离出来的很多生物活性化合物，能够对结肠癌、乳腺癌、肺癌和肝癌具有很强的抑制活性，食用菌多糖、肽和蛋白质具有免疫调节和癌症抑制的潜力,然而，由于缺乏对其作用机制的理解，这些生物活性食品成分的有效利用受到很大的阻碍。目前，食用菌活性成分的研究大多集中在食用菌多糖，只有少数几种公开的食用菌活性蛋白质，最新研究发现几种食用菌生物活性蛋白质有：从香菇液体菌丝体培养上清液中分离出一种蛋白质(LEP_91-3A₂)，其表现出对多种癌细胞的抑制肿瘤作用，有相关研究从草菇、灵芝、金针菇中鉴定了一系列真菌免疫活性蛋白(FIP-vvo，FIP-gts，FIP-fve等)，并且已经证明它们能够发挥抗肿瘤和免疫调节特性。

杏鲍菇中含多种生物活性成分，如活性蛋白质、多肽等，其可以提高人体免疫功能，对人体具有抗癌、降血脂、润肠胃以及美容等作用。目前，杏鲍菇加工也仅限于脱水生制品，杏鲍菇酱，杏鲍菇罐头以及杏鲍菇脯等，尚未有关于杏鲍菇免疫蛋白的提取及其对结肠癌的抗肿瘤活性方面的研究和报道。

发明内容

本发明的目的在于解决现有技术的不足，提供一种杏鲍菇免疫蛋白的提取方法，工艺简单，条件温和，制得的杏鲍菇免疫蛋白纯度高。

技术方案

一种杏鲍菇免疫蛋白的提取方法，包括如下步骤：

(1)取新鲜杏鲍菇，去除柄部后，进行清洗、切片，再进行真空冷冻干燥，将冻干的杏鲍菇粉碎后过200目筛，得到杏鲍菇粉；

(2)以1:15-25的料液比，往杏鲍菇粉中加入乙酸水溶液，pH值调为2。搅拌提取20-30h，然后采用60-80％梯度硫酸铵沉淀法，得到杏鲍菇粗蛋白；

(3)取杏鲍菇粗蛋白用去离子水配制杏鲍菇粗蛋白的水溶液，上DEAE-纤维素柱，分别以0、0.1、0.3、0.5mol/L NaCl溶液进行梯度洗脱，收集0.3mol/L NaCl洗脱得到的组分,进行透析，最后冷冻干燥，得到的产物即为杏鲍菇免疫蛋白。

步骤(1)中，所述真空冷冻干燥的真空度为0.100MPa，真空冷冻干燥分为四个阶段：升温至25℃并维持2-3小时；第二阶段：升温至35℃并维持3小时；第三阶段：升温至45℃并维持3小时；第四阶段：升温至55℃并维持3小时；第五阶段：升温至65℃并维持2-3小时。

步骤(2)中，乙酸水溶液的体积浓度为0.05％。

步骤(3)中，所述杏鲍菇粗蛋白的水溶液的浓度为0.02g/ml。