[发明专利]利用Crispr技术敲除T合酶基因构建的O-型糖基化异常的结肠癌细胞系在审
| 申请号： | 201810300881.7 | 申请日： | 2018-04-04 |
| 公开（公告）号： | CN108504693A | 公开（公告）日： | 2018-09-07 |
| 发明（设计）人： | 温韬;安广宇;董希琛;刘健 | 申请（专利权）人： | 首都医科大学附属北京朝阳医院 |
| 主分类号： | C12N15/90 | 分类号： | C12N15/90;C12N9/22;C12N15/867 |
| 代理公司： | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人： | 关畅;陈晓庆 |
| 地址： | 100020*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 糖基化 结肠癌细胞系 敲除 结肠癌细胞 合酶基因 构建 功能丧失 结直肠癌 直接转化 中间媒介 基因 基因组 慢病毒 制备 质粒 细胞 研究 | ||
1.一种O-型糖基化异常的结肠癌细胞系的制备方法，包括如下步骤：利用CRISPR/Cas9系统对结肠癌细胞基因组中的C1GALT1基因进行编辑，进而使所述T-synthase功能丧失，得到O-型糖基化异常的结肠癌细胞系。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述CRISPR/Cas9系统包括sgRNA；
或，所述sgRNA的靶序列为C1GALT1基因的第39-58位。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述编辑的方法为向所述结肠癌细胞中导入C1GALT1基因编辑的慢病毒载体；
或，所述C1GALT1基因编辑的慢病毒载体含有所述sgRNA的编码基因和Cas9蛋白的编码基因。
4.根据权利要求1-3任一所述的方法，其特征在于：所述C1GALT1基因编辑的慢病毒载体为将双链DNA分子插入慢病毒表达载体的酶切位点间得到的载体；
所述双链DNA分子是将单链DNA分子甲和单链DNA分子乙退火制备得到的；
所述单链DNA分子甲的核苷酸序列如序列1所示；
所述单链DNA分子乙的核苷酸序列如序列2所示。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述C1GALT1基因编辑的慢病毒载体为将所述双链DNA分子插入LentiCRISPRV2载体的BsmBI酶切位点间得到的载体。
6.根据权利要求1-5任一所述的方法，其特征在于：所述结肠癌细胞为结肠癌细胞HCT116。
7.按照权利要求1-6中任一所述的方法制备得到的O-型糖基化异常的结肠癌细胞系。
8.权利要求3中所述的C1GALT1基因编辑的慢病毒载体。
9.权利要求3中所述的C1GALT1基因编辑的慢病毒载体在制备O-型糖基化异常的结肠癌细胞系中的应用。
10.根据权利要求1-6任一所述的方法或权利要求7所述的细胞系或权利要求9所述的应用，其特征在于：所述O-型糖基化异常为T-synthase控制的O-型聚糖链延伸异常。
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