[发明专利]一种用于脂溶性物质的抑菌特性检验方法

说明书

本发明涉及一种用于脂溶性物质的抑菌特性检验方法，该方法包括如下步骤：（1）配置带菌肉汤：根据检验要求，培养含有相应菌种的带菌肉汤；（2）脂溶性样品的处理：将脂溶性样品与吐温20、生理盐水混合，混合充分后加入适量胰酶溶液使其充分反应，离心，取清液，并用水倍比稀释，从1/4稀释至1/1024；（3）液体培养基培养：将不同浓度稀释的样品加入相应带菌肉汤含量的试管中后，放入恒温摇床按照菌种的最佳培养条件培养过夜；（4）固体培养基培养：将摇床培养得到的菌液，在合适的培养基上划线培养，过夜，观察结果并记录，通过结果评价出不同性质的脂溶性样品对不同细菌的抑菌能力，从而得出其最小抑菌浓度。

技术领域

本发明涉及一种抑菌试验方法，具体涉及一种用于脂溶性物质的抑菌特性检验方法，属于样品检验技术领域。

背景技术

众所周知，大量使用抗生素会导致细菌耐药性增加，且效果越来越受到限制，抗生素的滥用对生态系统平衡构成了严重威胁，抗生素的耐药性、残留性使人类医治细菌传染性疾病的难度也越来越大，人们对饲用抗生素的反对意识日趋强烈，需开发一种绿色、健康、高效的无抗替代物。精油作为一种具有挥发性的油脂类，具有较好的抑菌效果。日粮添加精油也可以促进脂溶性维生素A、D、E、K的吸收利用以及改善饲料的理化性质。因此，发明人试将不同的作用效果的精油通过改良配比投入到饲料中作为抗生素替代物使用。但使用时需要确定一个合适的添加浓度，以确保其发挥最大的使用效果，以期达到利益和效益双赢。本发明所指精油样品可以是任何脂溶性样品，但本发明中的精油样品主要针对肠道细菌微生物起作用，因此需要试验得出不同精油样品的在最小抑菌浓度。

常用的抑菌试验方法主要包括定性测定的扩散法、定量测定的稀释法和E试验，本发明是在牛津杯法的基础上进行探索。由于脂溶性样品与水无法共融，所以在测定非水溶性样品时需要找到一种合适的助溶剂，来实现共融的状态，达到在稀释倍比和牛津杯中扩散的目的。但是通过探索发明人发现脂溶性样品最小抑菌浓度的测定，牛津杯法并不合适，需要一种适合测定油脂类样品最小抑菌浓度的抑菌试验方法。本发明通过一定的探索，找到了一种适合测定脂溶性样品抑菌试验的方法，为测定脂溶性样品的最小抑菌浓度开发了新的途径。

发明内容

本发明提供一种测定脂溶性样品的抑菌试验方法，该方法更容易的评价出不同性质的脂溶性的抑菌物质和三丁酸甘油酯的混合物对不同细菌的抑菌能力，从而更易得出一种脂溶性抑菌样品的最小抑菌浓度，对其抑菌能力做出更全面的评估。

为实现上述目的，本发明采用下述技术方案：

一种用于脂溶性物质的抑菌特性检验方法，该方法包括如下步骤：

(1)配置带菌肉汤：根据检验要求，培养含有相应菌种的带菌肉汤；

(2)脂溶性样品的处理：将脂溶性样品与吐温20、生理盐水混合，脂溶性样品与吐温20、生理盐水的体积比为1:0.8-1.2:1.8-2.2，混合充分后加入适量胰酶溶液使其充分反应，然后4℃在相对离心力(RCF)为20000g时离心，取清液，并用水倍比稀释，从1/4稀释至1/1024；

(3)液体培养基培养：将不同浓度稀释的样品加入相应带菌肉汤含量的试管中后，放入恒温摇床按照菌种的最佳培养条件培养过夜；

(4)固体培养基培养：将摇床培养得到的菌液，在合适的培养基上划线培养，过夜，观察结果并记录，通过结果评价出不同性质的脂溶性样品对不同细菌的抑菌能力，从而得出其最小抑菌浓度。

作为优选，步骤(1)具体过程为：高压灭菌适量适用于不同菌种的肉汤，大肠杆菌选择LB肉汤，金黄色葡萄球菌选择7.5％氯化钠肉汤，沙门氏菌使用氯化镁孔雀绿肉汤，称取适量肉汤加入水溶解，经121℃15min灭菌后，待冷却至65℃，将菌液同培养肉汤按照1:20的体积比直接注入培养肉汤，培养过夜，使细菌生长至最适生长浓度，得到带菌肉汤。