[发明专利]一种重组人β2-微球蛋白聚合物的制备方法有效
申请号: | 201810301759.1 | 申请日: | 2018-04-04 |
公开(公告)号: | CN108503864B | 公开(公告)日: | 2021-04-13 |
发明(设计)人: | 朱碧银;杨耿周;魏钟杰 | 申请(专利权)人: | 菲鹏生物股份有限公司 |
主分类号: | C08J3/24 | 分类号: | C08J3/24;C08L89/00;C12N15/70;C12N15/12;C07K16/28 |
代理公司: | 北京超凡志成知识产权代理事务所(普通合伙) 11371 | 代理人: | 刘书芝 |
地址: | 518000 广东省深圳市南山区西丽留仙洞中山园路1001号T*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 重组 球蛋白 聚合物 制备 方法 | ||
1.一种重组人β2-微球蛋白聚合物的制备方法,其特征在于,包括:
制备具有天然活性的重组人β2-微球蛋白;
将所述具有天然活性的重组人β2-微球蛋白在第一缓冲液中透析;
加入交联剂,进行交联反应,得到重组人β2-微球蛋白聚合物。
2.如权利要求1所述重组人β2-微球蛋白聚合物的制备方法,其特征在于,所述“加入交联剂,进行交联反应,得到重组人β2-微球蛋白聚合物”,包括:
将透析的所述具有天然活性的重组人β2-微球蛋白与所述交联剂按照体积比为10μL:15mL的比例混合,在室温条件下反应30分钟,得到反应物;
在所述反应物中加入第二缓冲液,室温放置15分钟终止所述交联反应,得到所述重组人β2-微球蛋白聚合物。
3.如权利要求2所述重组人β2-微球蛋白聚合物的制备方法,其特征在于,
所述第一缓冲液为pH7.8的PBS缓冲液;
所述第二缓冲液为终浓度是50mM的pH8.8的Tris-HCl缓冲液。
4.如权利要求1所述重组人β2-微球蛋白聚合物的制备方法,其特征在于,所述“制备具有天然活性的重组人β2-微球蛋白”包括:
获取重组人β2-微球蛋白的基因序列并根据所述基因序列构建重组表达质粒,将所述重组表达质粒进行酶切得到目的序列,将切出的目的序列连入原核表达载体中,转化表达宿主细胞,得到所述表达质粒菌株;
对所述表达质粒菌株进行原核表达,得到蛋白上清液;
纯化所述蛋白上清液,得到纯化重组蛋白;
将所述纯化重组蛋白用第三缓冲液透析,按照预设质量比例加入肽链内切酶在23-28℃条件下进行酶切6-8小时,得到具有天然活性的重组人β2-微球蛋白。
5.如权利要求4所述重组人β2-微球蛋白聚合物的制备方法,其特征在于,所述原核表达载体为pET-32a原核表达载体;
所述表达宿主细胞为大肠杆菌Origami B DE3。
6.如权利要求4所述重组人β2-微球蛋白聚合物的制备方法,其特征在于,所述肽链内切酶为重组人肠激酶;
所述预设质量比例为具有天然活性的重组人β2-微球蛋白:重组人肠激酶=50:1-100:1。
7.如权利要求6所述重组人β2-微球蛋白聚合物的制备方法,其特征在于,所述第三缓冲液为pH8.0的肠激酶酶切缓冲液;
所述肠激酶酶切缓冲液包括50mM Tris和1mM CaCl2。
8.一种具有天然活性的重组人β2-微球蛋白诊断试剂盒,其特征在于,包括如权利要求1~7任一项所述的制备方法获得的具有天然活性的重组人β2-微球蛋白聚合物制备的标准品。
9.一种如权利要求1-7中任一项所述重组人β2-微球蛋白聚合物的制备方法所制备的具有天然活性的重组人β2-微球蛋白聚合物在制备单克隆抗体的应用。
10.一种如权利要求1-7任一项所述重组人β2-微球蛋白聚合物的制备方法所制备的具有天然活性的重组人β2-微球蛋白聚合物在制备多克隆抗体的应用,包括:
基于免疫动物,以重组人β2-微球蛋白聚合物作为免疫原进行免疫,得到重组人β2-微球蛋白多克隆抗体。
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