[发明专利]一种高活性胰岛素样生长因子-1的制备方法在审
| 申请号： | 201810304677.2 | 申请日： | 2018-04-08 |
| 公开（公告）号： | CN108265063A | 公开（公告）日： | 2018-07-10 |
| 发明（设计）人： | 张晨 | 申请（专利权）人： | 张晨 |
| 主分类号： | C12N15/16 | 分类号： | C12N15/16;C12N15/70;C07K14/65 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 361000 福*** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 黏附 生长因子 制备 胰岛素样生长因子 重组原核表达载体 原核宿主细胞 溶液条件 高活性 构建 编码基因克隆 生长因子作用 原核表达载体 重组人胰岛素 人胰岛素样 生物发酵法 编码基因 不稳定性 产品成本 前体序列 融合蛋白 氨基酸 复性 前体 转入 引入 | ||
【权利要求书】：
1.一种高活性胰岛素样生长因子-1的制备方法，其特征在于，包括下列步骤：
S1，将3’端引入黏附型氨基酸前体序列编码基因的重组人胰岛素样生长因子-1的编码基因克隆入含有His标签的原核表达载体，构建成重组原核表达载体；
S2，将S1构建的重组原核表达载体转入合适的原核宿主细胞；
S3，培养S2构建的原核宿主细胞，使其表达含有黏附型前体的人胰岛素样生长因子-1的融合蛋白，并进行纯化与复性；
S4，经过S3后获得含有黏附型前体的人胰岛素样生长因子-1的融合蛋白，然后进行酪氨酸羟化反应，得到具有高活性的黏附型人胰岛素样生长因子-1。
2.根据权利要求1所述的一种高活性胰岛素样生长因子-1的制备方法，其特征在于，所述原核宿主细胞为大肠杆菌。
3.根据权利要求1所述的一种高活性胰岛素样生长因子-1的制备方法，其特征在于，所述S3中，采用蛋白复性液复性，所述蛋白复性液包括20mM三羟甲基氨基甲烷盐酸盐和0.5MNaCl，用盐酸调pH至7.0-7.8，3-5℃保存，用时作4-6倍稀释。
4.根据权利要求1所述的一种高活性胰岛素样生长因子-1的制备方法，其特征在于，所述酪氨酸羟化反应具体为：将胰岛素样生长因子-1前体蛋白中的酪氨酸羟化成DOPA。
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