[发明专利]一种烟曲霉菌琼脂珠及其制作方法

权利要求书

1.一种烟曲霉菌琼脂珠的制作方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)制备烟曲霉菌孢子悬液；

(2)将步骤(1)制备的烟曲霉菌孢子悬液与马铃薯葡萄糖琼脂培养基混合，将混合物加入至含有矿物油的容器中，搅拌，离心，使其珠粒化，倒掉上清后，加入无菌磷酸盐缓冲液，离心，洗涤除油，筛选直径小于280μm的珠粒，即得。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，烟曲霉菌孢子悬液的制备方法为：将烟曲霉菌接种于马铃薯葡萄糖琼脂培养基，37℃培养4天；用含有0.1％吐温80的磷酸盐缓冲液冲洗培养基，并收集孢子悬液，10000rpm，离心3min，去上清，再用含有0.1％吐温80的磷酸盐缓冲液重悬，过滤；调整浓缩孢子悬液浓度为1.0×10⁹/ml。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，烟曲霉菌孢子悬液与马铃薯葡萄糖琼脂培养基按体积比1：(0.5-1.5)混合。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，烟曲霉菌孢子悬液与马铃薯葡萄糖琼脂培养基按体积比1：1混合。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，将混合后的混合物迅速加入至含有矿物油的烧瓶中，先室温搅拌6min，然后碎冰上搅拌10min；再移至离心管中，4℃，9000rpm离心20min，使其珠粒化。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，加入无菌磷酸盐缓冲液，室温下，400rpm离心10min，除油。

7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，利用平板计数法CFU以定量琼脂珠粒内的分生孢子数，浓度高时加入适量琼脂进行稀释，直至调整至琼脂珠内的孢子浓度为5×10⁶/ml。

8.权利要求1-7任一项所述的制备方法制作得到的烟曲霉菌琼脂珠。

9.权利要求8所述的烟曲霉菌琼脂珠在建立烟曲霉菌定植动物模型中的应用。

10.一种烟曲霉菌定植动物模型的构建方法，其特征在于，步骤如下：

将权利要求8所述的烟曲霉菌琼脂珠导入到试验动物的气管内，并注入空气，随试验动物吸气，促使琼脂珠进入试验动物的肺部。