[发明专利]pEGFP-N1/SEPT8真核表达载体及构建方法及SEPT8基因干扰片段和应用

说明书

本发明涉及基因工程技术领域，具体涉及pEGFP‑N1/SEPT8真核表达载体及构建方法及SEPT8基因干扰片段和应用。本发明的pEGFP‑N1/SEPT8真核表达载体的序列具有SEQ ID NO:1所示的序列。该pEGFP‑N1/SEPT8真核表达载体的构建方法具有操作简单、操作难度低的优点。SEPT8基因的siRNA干扰片段，包括siRNA1、siRNA2、siRNA3和siRNA4四个。SEPT8基因的siRNA干扰片段在制备用于抑制肿瘤细胞迁移、侵袭的应用，具有深远的开发价值。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，具体涉及pEGFP-N1/SEPT8真核表达载体及构建方法及SEPT8基因干扰片段和应用。

背景技术

septin 8(SEPT8)基因定位于人染色体5q31.1，是Septin基因家族成员之一。Septin蛋白是构成细胞骨架的主要成分，并在细胞内物质运输、细胞分裂、细胞周期调控与凋亡等过程中发挥重要作用。近年来发现SEPT8在鳞状细胞癌(SCC)等恶性肿瘤中呈高表达状态，并且与患者预后不良相关。迄今为止，尚未见SEPT8在胃癌细胞中的表达以及细胞功能实验研究的报道。

发明内容

本发明的目的之一在于针对现有技术的不足，提供pEGFP-N1/SEPT8真核表达载体。

本发明的目的之二在于针对现有技术的不足，提供pEGFP-N1/SEPT8真核表达载体的构建方法。

本发明的目的之三在于针对现有技术的不足，提供SEPT8基因的siRNA干扰片段。

本发明的目的之四在于针对现有技术的不足，提供SEPT8基因的siRNA干扰片段的应用。

为了实现上述目的之一，本发明采用如下技术方案：

提供pEGFP-N1/SEPT8真核表达载体，所述pEGFP-N1/SEPT8真核表达载体的序列具有SEQ ID NO:1所示的序列。

为了实现上述目的之二，本发明采用如下技术方案：

提供pEGFP-N1/SEPT8真核表达载体的构建方法，它包括以下步骤：

步骤一，在NCBI上查找SEPT8(NM_001098811.1)的序列作为目的基因序列，然后设计出引物SEPT8-P1、SEPT8-P2；其中，引物SEPT8-P1的序列具有SEQ ID NO:2所示的序列，引物SEPT8-P2的序列具有SEQ ID NO:3所示的序列；所述目的基因序列具有SEQ ID NO:4所示的序列；

步骤二，用引物SEPT8-P1、SEPT8-P2扩增目的基因序列，其中，目的基因序列的两端分别含酶切位点NheI和HindIII；

步骤三，目的基因序列经NheI和HindIII消化后与载体pEGFP-N1连接，得到重组载体pEGFP-N1/SEPT8，即为所述pEGFP-N1/SEPT8真核表达载体。

为了实现上述目的之三，本发明采用如下技术方案：

提供SEPT8基因的siRNA干扰片段，包括siRNA1、siRNA2、siRNA3和siRNA4四个干扰片段；

所述siRNA1干扰片段具有SEQ ID NO:5所示的序列；

所述siRNA2干扰片段具有SEQ ID NO:6所示的序列；

所述siRNA3干扰片段具有SEQ ID NO:7所示的序列；

所述siRNA4干扰片段具有SEQ ID NO:8所示的序列。

为了实现上述目的之四，本发明采用如下技术方案：