[发明专利]一种快速检测沙门氏菌污染的方法及试剂盒

权利要求书

1.一种快速检测沙门氏菌的检测方法，包括如下步骤：

步骤一，制备探针分子：根据沙门氏菌的基因组结构和保守序列，选取沙门氏菌的invA和invE基因作为检测目标片段，根据GenBank公开的沙门氏菌invA和invE基因序列，分别设计探针分子，所述invA基因检测的探针分子序列为5’-GCGAGTGGTAAATTATTCCGATGAAGT-3’，所述invE基因检测的探针分子的序列为5’- GTGATTTAGTCCTTGTGTTACGCGA-3’，上述基因检测的探针分子的5’端分别采用不同的报告荧光基团进行标记，即invA基因检测的探针分子结构为：报告荧光基团1- GCGAGTGGTAAATTATTCCGATGAAGT；invE基因检测的探针分子结构为：报告荧光基团2- GTGATTTAGTCCTTGTGTTACGCGA；

步骤二，将聚苯乙烯纳米球溶液与步骤一所制得的探针分子：报告荧光基团1-GCGAGTGGTAAATTATTCCGATGAAGT以及报告荧光基团2- GTGATTTAGTCCTTGTGTTACGCGA混合，然后加入待测样品，检测荧光。

2.根据权利要求1所述的快速检测沙门氏菌的检测方法，其特征在于，步骤一中所述的报告荧光基团1和报告荧光基团2分别选自异硫氰酸荧光素(FITC)、羟基荧光素(FAM)、四氯荧光素(TET)、四甲基罗丹明（TAMRA）、ROX、CY3、CY5、CY5.5、CAL red、Red640和Texas Red等，且报告荧光基团1和2不同。

3.根据权利要求1或2所述的快速检测沙门氏菌的检测方法，其特征在于，步骤二中所述的聚苯乙烯纳米球由以下方法制备得到：将0.05g过硫酸氨和0.05g十二烷基磺酸钠溶解到10mL水中，再加入12mL苯乙烯，将反应物加热一段时间，然后将产物离心，用甲醇冲洗移除SDS，即制得聚苯乙烯纳米球。

4.一种用于沙门氏菌检测的试剂盒，其包括：invA基因检测的探针分子溶液、invE基因检测的探针分子溶液、聚苯乙烯纳米球溶液、阳性对照、阴性对照，其中invA基因检测的探针分子结构为：报告荧光基团1- GCGAGTGGTAAATTATTCCGATGAAGT；invE基因检测的探针分子结构为：报告荧光基团2- GTGATTTAGTCCTTGTGTTACGCGA。

5.根据权利要求4所述的用于沙门氏菌检测的试剂盒，其特征在于，所述的报告荧光基团1和报告荧光基团2分别选自异硫氰酸荧光素(FITC)、羟基荧光素(FAM)、四氯荧光素(TET)、四甲基罗丹明（TAMRA）、ROX、CY3、CY5、CY5.5、CAL red、Red640和Texas Red等，且报告荧光基团1和2不同。

6.根据权利要求4所述的用于沙门氏菌检测的试剂盒，其特征在于，所述阴性对照为去离子水，所述阳性对照为沙门氏菌的核酸提取物，例如购自CGMCC的编号为CGMCC 1.1190的肠沙门氏菌肠亚种；或者购自ATCC的编号为ATCC14028的鼠伤寒沙门氏菌；也可以是实验室分离、鉴定的沙门氏菌菌株，采用商业化的核酸提取试剂盒对沙门氏菌进行提取获得的沙门氏菌核酸提取物。