[发明专利]一种双香豆素衍生物及其提取方法和应用

说明书

本发明公开了一种双香豆素衍生物及其制备方法和应用，包括以下步骤：(1)在菌种培养基中对猫儿屎内生真菌塔宾曲霉DS37进行菌种培养；(2)在发酵培养基中对步骤(1)中获得的菌种进行发酵培养，然后用石油醚、乙酸乙酯和甲醇浸提若干次，合并提取液并过滤，回收混合溶剂，滤液减压浓缩，得到粗品浸膏，最后经硅胶柱层析得到双香豆素衍生物。本发明制得的双香豆素衍生物有很好的抑制绿脓杆菌、乳链球菌和烟草赤星病菌作用，可以用于农业防治和药剂防治技术；并且该双香豆素衍生物具有较强的抗A549、MCF‑7和HepG2细胞株活性，可以为抗肿瘤药物的开发提供一种可能。

技术领域

本发明涉及双香豆素衍生物制备领域，具体涉及一种双香豆素衍生物及其提取方法和应用。

背景技术

猫儿屎(Decaisnea insignis(Griff.)Hook.f.&Thomson)系木通科(Lardiyabalaeeae)猫儿屎属植物。丛生落叶直立灌木，广泛分布于我国西南部和中部地区。木通科植物猫儿屎是我国传统的民间中草药，味辛、甘、性平，根及果实甘、凉具有清肺止咳，祛风除湿，治疗风湿关节痛，抗肿瘤等功效。迄今为止，对猫儿屎的研究主要集中在它的植物化学成分，而对其内生真菌的研究相对较少。据报道，内生真菌次生代谢产物种类主要有：生物碱、萜类、甾体、有机酸类等化合物，均具有一定的生物活性。然而未见猫儿屎内生真菌中有关双香豆素衍生物及其体外活性的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种双香豆素衍生物及其提取方法和应用，以克服上述现有技术存在的缺陷，本发明从猫儿屎内生真菌DS37次生代谢产物中分离得到双香豆素衍生物，且该双香豆素衍生物有较好的抑菌活性和抗肿瘤活性。

为达到上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种双香豆素衍生物，所述双香豆素衍生物的分子式为C₂₄H₂₂O₈，化学结构式如下：

一种双香豆素衍生物的提取方法，包括以下步骤：

(1)在菌种培养基中对猫儿屎内生真菌塔宾曲霉DS37进行菌种培养；

(2)在发酵培养基中对步骤(1)中获得的菌种进行发酵培养，然后用石油醚、乙酸乙酯和甲醇浸提若干次，合并提取液并过滤，回收混合溶剂，滤液减压浓缩，得到粗品浸膏；

(3)将步骤(2)得到的粗品浸膏在硅胶色谱柱上，分别用体积梯度为1:0:0,0:1:0,0:1:1,0:0:1的石油醚/乙酸乙酯/甲醇洗脱剂进行洗脱，得到A-D四个组分；

(4)将步骤(3)得到的B组分在硅胶色谱柱上，分别用体积梯度为100:0,100:20,100:50,100:100,100:200,0:100的石油醚/乙酸乙酯洗脱剂进行洗脱，得到B1-B6六个组分，B4组分继续在硅胶色谱柱上，用体积梯度为100:20,100:50,100:80,100:100,100:120,100:150,100:180,100:190,100:195,100:200,100:250,100:300,0:100的石油醚/乙酸乙酯洗脱剂进行洗脱，得到B4.1-B4.13十三个组分，B4.9组分自然结晶，得到双香豆素衍生物。

进一步地，步骤(1)中所述的菌种培养基含有质量百分数组分：葡萄糖3％，硝酸钠0.3％，磷酸氢二钾0.1％，氯化钾0.05％，无水硫酸镁0.05％，硫酸亚铁0.001％，余量为水；

步骤(2)中所述的发酵培养基含有质量百分数组分：大米70-80％，氯化钠5％，硝酸钠0.1％，谷氨酸钠0.5％，余量为水，且所述的发酵培养基pH＝8。

进一步地，步骤(1)中所述的菌种培养的条件为：28℃下培养7-10天；

步骤(2)中所述的发酵培养的条件为：20-24℃下培养35-40天；