[发明专利]低氧下微RNA-138-5p对人胰腺癌细胞凋亡影响的检测方法

说明书

本发明属于含有机有效成分的医药配制品技术领域，公开了一种低氧下微RNA‑138‑5p对人胰腺癌细胞凋亡影响的检测方法，miR‑138‑5p mimics上调后，western blot检测实验组自噬相关蛋白被抑制；共聚焦显微镜观察实验组胰腺肿瘤细胞自噬小体增多。凋亡细胞百分率加坏死细胞百分率且各组之间差异均有显著意义，western blot检测实验组凋亡相关蛋白表达上调。miR‑138‑5p与SIRT1 3’UTR区域互补结合，抑制SIRT1表达减少。miR‑138‑5p在胰腺癌细胞低氧条件下自噬流中有着重要的作用，通过直接靶向调控SIRT1的表达而抑制低氧诱导的自噬，同时促进panc‑1胰腺癌细胞的凋亡。

技术领域

本发明属于含有机有效成分的医药配制品技术领域，尤其涉及一种低氧下微RNA-138-5p对人胰腺癌细胞凋亡影响的检测方法。

背景技术

目前，业内常用的现有技术是这样的：胰腺癌恶性程度较高，5年生存率低于5％，大多数患者的预后并不十分满意。2015年的中国癌症统计中显示，胰腺癌的致死率在所有癌症中排名第六。胰腺癌每年发生率都在逐渐增加，在不久的将来有可能成为致死率第二的疾病。因此，进一步阐明胰腺癌发生、发展的分子机制对其早期诊断和开发新的治疗位点具有重要意义。肿瘤缺氧微环境是人类恶性实体肿瘤的基本特征之一，肿瘤缺氧与其恶性生物学行为密切相关，临床研究显示：胰腺癌在CT增强扫描下呈无血管的外观特征，瘤体内呈低氧气张力，表明胰腺癌处于低氧环境，具有缺血缺氧的病理生理特点。缺氧与胰腺癌的发生、发展、侵袭转移、复发及化疗抵抗等恶性生物学特性密切相关。微RNA(miR)是一类广泛存在于真核生物中的小分子，长度约为19-23个核苷酸。高度保守并且不直接编码蛋白而通过与目的基因3'-非翻译区域的mRNA结合，进而降解miR和(或)抑制其翻译。越来越多的证据显示miRNAs在调控细胞生物行为上有重要的作用。但miRNA在胰腺癌中的功能尚不完全清楚，其与自噬条件的关系尚不明确。然而miRNA以及自噬可能在胰腺癌的发生发展中发挥重要作用，因此明确miRNA与胰腺癌自噬条件的关系将有助于对胰腺癌的诊断和治疗。

综上所述，现有技术存在的问题是：目前关于miRNA与胰腺癌自噬条件的研究尚知之甚少，miRNA在胰腺癌中的功能尚不完全清楚，其与自噬条件的关系尚不明确。

解决上述技术问题的难度和意义：本发明通过检测胰腺癌在低氧条件下miRNAs的差异性表达以及相关生物学效应检测探讨了其在胰腺癌发生发展中的作用。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种低氧下微RNA-138-5p对人胰腺癌细胞凋亡影响的检测方法，通过检测胰腺癌在低氧条件下miRNAs的差异性表达以及相关生物学效应检测探讨了其在胰腺癌发生发展中的作用。最终选择差异最为显著的基因miRNA-138-5p做为分析对象，明确其抑制胰腺癌发生发展的生物学作用。

本发明是这样实现的，一种低氧下微RNA-138-5p对人胰腺癌细胞凋亡影响的检测方法，所述低氧下微RNA-138-5p对人胰腺癌细胞凋亡影响的检测方法包括以下步骤：

步骤一，利用基因芯片对常氧及低氧状态下胰腺癌细胞进行差异miRNA筛选，将胰腺癌panc-1细胞系分为两组：miR-138-5p mimics转染组、对照组；

步骤二，分析miR-138-5p在低氧条件下对人胰腺癌细胞系PANC1的自噬以及凋亡的影响；

步骤三，双荧光素酶报告基因分型系统验证miR-138-5p与SIRT1 3'端非编码区域的互补结合，证实SIRT1是miR-138-5p下游作用靶点。

进一步，所述步骤二中利用流式细胞仪、共聚焦显微镜及western blot技术，分析miR-138-5p在低氧条件下对人胰腺癌细胞系PANC1的自噬以及凋亡的影响。