[发明专利]青枯病植物疫苗生产菌FJAT-1458的发酵方法

说明书

本发明属于微生物发酵领域，具体公开了一种青枯病植物疫苗生产菌FJAT‑1458的发酵方法，将青枯病植物疫苗生产菌FJAT‑1458接种至SPA液体发酵培养基中制备生产用的液体菌种；以微生物发酵床养猪垫料与黄豆饼粉按照质量比为6～8:2～4的比例混合后，加入质量百分数为0.04～0.06％的K₂HPO₄和0.02～0.03％的MgSO₄，控制含水量40～50％，作为制备菌肥生产的固体培养基，灭菌后分装到已灭菌的发酵盒中，控制通气量65～75％，接种液体菌种，34～36℃条件下进行固体发酵培养40‑60h，发酵结束后将其拌匀，即得青枯病植物疫苗菌菌肥。本发明采用固态发酵方式，利用微生物发酵床养猪垫料作为固态发酵培养基成份之一，即可为菌株发酵提供所需养分，降低生产成本，又可降低农副产品废弃物对环境的污染。

技术领域

本发明属于微生物发酵领域，具体地说，涉及一种青枯病植物疫苗生产菌FJAT-1458的发酵方法。

背景技术

由青枯雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum)引起的作物青枯病是一种毁灭性的土传病害。目前对作物青枯病的防治尚未有理想的药剂，由于青枯病原菌为兼性寄生，品种抗性利用难度很大，使得该病害的防治一直是一大难题。在自然界中，青枯雷尔氏菌存在丰富的致病力分化，即强致病力、无致病力和过渡型菌株。研究发现青枯雷尔氏菌无致病力菌株具有免疫接种的功能，苗期预先接种其就会侵入植株体内，并随着植株的生长在体内繁殖，通过竞争生长阻碍病原菌的侵入、从而抑制病害发生。因此，无致病力菌株可用作为“植物疫苗”，在作物青枯病防治中具有重要的生防应用潜力。

福建省农业科学院农业生物资源研究所经多年研究获得一株性状稳定无致病力青枯雷尔氏菌(plant vaccin avirulent strain FJAT-1458)，研究该菌株的发酵工艺和生产工艺，并研制出青枯免疫液体接种剂“鄂鲁冷特”，对番茄的盆栽苗试验防效均达90％以上，田间防效达75％以上。在设施番茄示范应用中比较植物疫苗、生防菌制剂及化学农药对番茄青枯病防治效果，结果表明，植物疫苗能较好地抑制番茄青枯病的发生，其防效(77.45％)与化学农药-农用链霉素(77.23％)相当，配合生防菌“安地”施用，效果更佳，防效达81.81％，具有良好应用潜力。

菌株生产发酵常采用液体发酵或液固双向发酵。在发酵设备和工艺方面，虽深层液体发酵工艺都较为成熟，但用于农用微生物制剂的生产，存在成本高、代谢物不能充分利用、有废液排放等弊端。而固态发酵具湿度低，能耗低，培养基来源广泛等优越性，特别适宜发展中国家生物农药的有效生产。

然而，目前常用固态发酵原料为麸皮、米糠、黄豆粉饼、花生粉饼等农业副产物，存在价格高、高温灭菌后粘度增加、疏松度不够、空隙小、后续接种困难等问题，因此寻找一种新的农业副产物作为固态发酵的主要培养基是必需的。

近几年兴起的微生物发酵床养猪技术产生的副产物--微生物发酵床养猪垫料(以下简称垫料)，它是通过微生物将谷壳，锯末、猪粪、尿等物混合经原位分解发酵而成，富含养分，可考虑作为生产青枯病植物疫苗菌固态发酵原料进行生产。

发明内容

为了解决现有技术中存在的问题，本发明的目的是针对青枯病植物疫苗菌FJAT-1458，提供一种利用微生物发酵床养猪垫料生产青枯病植物疫苗菌菌肥的方法，采用固态发酵方式，利用微生物发酵床养猪垫料作为固态发酵培养基成份之一，即可为菌株发酵提供所需养分，降低生产成本，又可降低农副产品废弃物对环境的污染。辅以其他常用农业副产物如玉米粉、麦粒、棉籽壳、麸皮、黄豆饼粉，以活菌量为指标，通过单因素法和正交试验优化菌株的培养基成份和培养条件，获得最佳的培养条件，为地青枯病植物疫苗菌菌肥的工业化生产提供理论指导。

为了实现本发明目的，本发明的技术方案如下：

本发明提供一种青枯病植物疫苗生产菌FJAT-1458的发酵方法，所述方法包括如下步骤：