[发明专利]甲状腺癌转移相关基因检测用的PCR特异性引物、试剂盒及其使用方法

权利要求书

1.一种甲状腺癌转移相关基因检测用的PCR特异性引物组，其特征在于，包括如下三组扩增引物对中的至少一组：

第一组由如下基因的扩增引物对构成：APC基因、CDH1基因、EGFR基因、KIT基因、MAP2K1基因、NOTCH1基因、SMAD4基因、VHL基因；

第二组由如下基因的扩增引物对构成：APC基因、CDH1基因、DDR2基因、EGFR基因、KIT基因、MLH1基因、NOTCH1基因、PIK3CA基因；

第三组由如下基因的扩增引物对构成：APC基因、CDH1基因、DDR2基因、EGFR基因、JAK3基因、KIT基因、MLH1基因、NOTCH1基因、PIK3CA基因、VHL基因；

其中，APC基因的扩增引物对序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示，CDH1基因的扩增引物对序列如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示，EGFR基因的扩增引物对序列如SEQ IDNO.5和SEQ ID NO.6所示，KIT基因的扩增引物对序列如SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示，NOTCH1基因的扩增引物对有三对：序列分别如SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10所示、如SEQ IDNO.11和SEQ ID NO.12所示、以及如SEQ ID NO.13和SEQ ID NO.14所示，SMAD4基因的扩增引物对有三对：序列分别如SEQ ID NO.15和SEQ ID NO.16所示、如SEQ ID NO.17和SEQ IDNO.18所示、以及如SEQ ID NO.19和SEQ ID NO.20所示，VHL基因的扩增引物对序列如SEQID NO.21和SEQ ID NO.22所示，MLH1基因的扩增引物对序列如SEQ ID NO.23和SEQ IDNO.24所示，JAK3基因的扩增引物对序列如SEQ ID NO.25和SEQ ID NO.26所示，PIK3CA基因的扩增引物对序列如SEQ ID NO.27和SEQ ID NO.28所示，MAP2K1基因的扩增引物对序列如SEQ ID NO.29和SEQ ID NO.30所示，DDR2基因的扩增引物对以及序列如SEQ ID NO.31和SEQ ID NO.32所示。

2.如权利要求1所述的甲状腺癌转移相关基因检测用的PCR特异性引物组，其特征在于，所述扩增引物对的各引物经过硫代修饰、脱氧尿嘧啶修饰及5’反向dT修饰中的一种或多种修饰。

3.如权利要求2所述的甲状腺癌转移相关基因检测用的PCR特异性引物组，其特征在于，所述扩增引物对的Tm值为60±2℃。

4.如权利要求1所述的甲状腺癌转移相关基因检测用的PCR特异性引物组，其特征在于，所述扩增引物对的两条引物的5’端分别连接有长度为50bp~70bp的用于与通用引物对的相应引物完全互补的序列片段或与通用引物对的相应引物的3’端的部分序列互补的序列片段。

5.如权利要求4所述的甲状腺癌转移相关基因检测用的PCR特异性引物组，其特征在于，所述通用引物对的两条引物的序列如SEQ ID NO.33和SEQ ID NO.34所示。

6.一种甲状腺癌转移相关基因检测用的试剂盒，其特征在于，包括如权利要求1~5中任一项所述的甲状腺癌转移相关基因检测用的PCR特异性引物组。

7.如权利要求6所述的甲状腺癌转移相关基因检测用的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括DNA提取试剂、PCR扩增缓冲液、DNA聚合酶及无核酸水中的至少一种。

8.如权利要求7所述的甲状腺癌转移相关基因检测用的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括人正常基因组DNA的质控品。