[发明专利]适用于太瑞斯梭孢壳霉的表达载体及其制备方法在审
| 申请号： | 201810317631.4 | 申请日： | 2018-04-10 |
| 公开（公告）号： | CN108642075A | 公开（公告）日： | 2018-10-12 |
| 发明（设计）人： | 陶文俊;廖国侠;刘刚;王娟 | 申请（专利权）人： | 深圳大学 |
| 主分类号： | C12N15/80 | 分类号： | C12N15/80 |
| 代理公司： | 深圳市恒申知识产权事务所(普通合伙) 44312 | 代理人： | 王利彬 |
| 地址： | 518060 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 表达载体 梭孢壳 启动子 终止子 制备 磷酸甘油醛脱氢酶基因 生物技术领域 大肠杆菌 多克隆位点 分离操作 高效表达 稳定表达 基因组 诱导 复制 上游 | ||
1.一种适用于太瑞斯梭孢壳霉的表达载体，其特征在于，所述表达载体含有pUC19质粒的序列，且所述pUC19质粒上的多克隆位点处插入有太瑞斯梭孢壳霉基因组中的3-磷酸甘油醛脱氢酶基因的启动子和终止子；其中，所述启动子在所述终止子的上游。
2.如权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述启动子的序列如SEQ ID NO.1所示，所述终止子的序列如SEQ ID NO.2所示。
3.如权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述表达载体的序列如SEQ ID NO.3所示。
4.如权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述启动子的序列的上游和所述终止子的序列的下游存在通用引物M13的结合位点。
5.如权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述启动子的序列和所述终止子的序列之间存在Xba I酶切位点和Kpn I酶切位点。
6.如权利要求1所述的表达载体，其特征在于，所述启动子的序列和所述终止子的序列之间连接有木聚糖酶基因序列。
7.一种如权利要求1-5任一项所述的表达载体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
以太瑞斯梭孢壳霉基因组为模板，进行PCR扩增，得到所述太瑞斯梭孢壳霉基因组中的3-磷酸甘油醛脱氢酶基因的启动子和终止子的序列；
提供pUC19质粒，将所述启动子和所述终止子插入到所述pUC19质粒上的多克隆位点处。
8.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于，利用SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示的引物对进行所述PCR扩增，得到所述3-磷酸甘油醛脱氢酶基因的启动子。
9.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于，利用SEQ ID NO.6和SEQ ID NO.7所示的引物对进行所述PCR扩增，得到所述3-磷酸甘油醛脱氢酶基因的终止子。
10.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于，将所述启动子和所述终止子插入到所述pUC19质粒上的多克隆位点处的步骤包括：
将启动子连接到T载体上，得到启动子-T载体重组质粒，将终止子连接到T载体上，得到终止子-T载体重组质粒；
通过Sph I和Xba I双酶切所述启动子-T载体重组质粒和所述pUC19质粒，然后进行重组，得到含有所述启动子序列的初始表达载体；
通过Kpn I和EcoR I双酶切所述终止子-T载体重组质粒和所述初始表达载体，然后进行重组，得到含有所述启动子和终止子的表达载体。
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