[发明专利]一种超高效合相色谱-串联质谱技术拆分、测定手性农药甲霜灵和烯酰吗啉对映体的方法

说明书

本发明属于分析化学领域和农药残留检测技术领域，具体是一种超高效合相色谱‑串联质谱技术拆分、测定手性农药甲霜灵和烯酰吗啉对映体的方法，涉及多种手性农药的外消旋体的拆分及定量方法。该方法采用QuEChERS方法提取烟草及干果中的甲霜灵和烯酰吗啉，用合相色谱手性固定相结合三重四极杆串联质谱同步检测了甲霜灵和烯酰吗啉2种手性农药的对映体。本发明首次采用合相色谱快速的对甲霜灵和烯酰吗啉进行手性分离，灵敏度高。以超临界CO₂为流动相，节省了大量有机溶剂的使用，绿色环保。

技术领域

本发明属于分析化学领域和农药残留检测技术领域，具体是一种超高效合相色谱-串联质谱技术拆分、测定手性农药甲霜灵和烯酰吗啉对映体的方法，涉及多种手性农药的外消旋体的拆分及定量方法。

背景技术

目前使用的农药中有25％是手性的，手性农药的生物活性存在对映体差异性，其活性往往只存在于一个或少数几个对映体中，而手性农药的对映体在环境中的消解和归趋往往也有明显的不同。即手性农药对映体在自然环境和生物体中的活性、毒性以及吸收、代谢、降解等诸多方面可能存在巨大差异。

农药甲霜灵，化学名D,L-(2,6-二甲基苯基)-N-(2’-甲氧基乙基)氨基丙酸甲酯，是一种易被植物吸收、上行传导的高效杀菌剂。该农药市售品为其R、S的外消旋体。但是药理研究表明，甲霜灵的主要杀菌效果来自于R体。侯经国等【分析化学，2003，31(3),307-310】采用手性色谱柱经高效液相色谱分离了甲霜灵的一组对映体，但是该方法手性柱合成繁琐，分离时间长。烯酰吗啉通常存在顺、反异构体（Z和E异构体），Z异构体有杀菌功能，属有效成份。其中 E异构体在水中的溶解度是Z异构体的两倍，除物理性质不同外,其光谱效应和离子化效率也存在差异【农药学学报，2011，13(2),169-173】。

上述甲霜灵和烯酰吗啉的结构式如下所示：

这两类农药也是常用于防治烟草黑胫病，在烟草中检出率较高，因而建立甲霜灵和烯酰吗啉对映体纯度的测定方法对于开发生产R体甲霜灵和Z型烯酰吗啉单一产品和生产厂家进行产品质量控制是十分必要的。

发明内容

本发明的目的是提供一种采用合相色谱-串联质谱技术拆分、测定手性农药甲霜灵和烯酰吗啉对映体的方法，该方法能快速、准确的将外消旋的甲霜灵和烯酰吗啉的一组对映体进行分离，并且可以准确定量，基质干扰少，环境友好。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：

一种超高效合相色谱-串联质谱技术拆分、测定手性农药甲霜灵和烯酰吗啉对映体的方法，包括以下步骤：

(1)样品前处理；样品可为烟草、谷物或干果。

(2)检测条件：将待测样品进行合相色谱-串联质谱检测，根据洗脱峰保留时间、目标化合物定量离子对和定性离子对分离各个洗脱峰，即得到各个手性农药对映体，

a、合相色谱检测条件如下：色谱柱：规格150 mm×3.0 mm，2.5µm的 ACQUITY UPC²Trefoil CEL1柱 ；流动相：超临界CO₂/乙醇，流速：2mL/min；梯度洗脱； 柱温：40 ℃；背压：1600 psi；进样量：2µL；

b、所述的梯度洗脱方式如下：初始至第2分钟CO₂和乙醇的体积比由99%:1%变成92%:8%; 第2分钟到第3.5分钟CO₂和乙醇的体积比从92%:8%变成88%:12%;第3.5分中到第4分钟CO₂和乙醇的体积比从88%:12%变成70%:30%;第4分钟到第5.5分钟CO₂和乙醇的体积比从77%:30%变成99%:1%;第5.5分钟到第8分钟CO₂和乙醇的体积比为99%:1%;