[发明专利]特异性诱导肿瘤细胞凋亡的重组人Fc抗体及其制备方法、用途

说明书

本发明提供了一种特异性诱导肿瘤细胞凋亡的重组人Fc抗体及其制备方法、用途，其要点是：通过人工合成方法直接合成人IgG抗体的Fc片段的HC2和HC3区基因片段，同时合成能特异性诱导肿瘤细胞凋亡的VP3基因，构建含Fc‑linker‑VP3单链抗体基因；将上述基因片段亚克隆到pPIC9K载体并转染毕赤酵母系统GS115菌株，或亚克隆到哺乳细胞表达载体及在哺乳细胞中表达重组的人Fc抗体蛋白；此重组人Fc抗体具有激活补体活性，引起ADCC作用，同时有很强的特异性诱导肿瘤细胞凋亡作用，可用于恶性肿瘤的治疗。

技术领域

本发明属抗体制药及其在恶性肿瘤中的应用，尤其是一种特异性诱导肿瘤细胞凋亡的重组人Fc抗体及其制备方法、及用该制备方法获得的制品在恶性肿瘤治疗中的应用。

背景技术

人体免疫系统是防御体内各种疾病发生发展的重要器官，它担负着免疫防御、免疫监视、免疫耐受和免疫调节4大免疫功能。抗体是执行这4大功能的最重要分子之一。抗体分子是机体受到抗原性物质刺激后产生的免疫球蛋白，它可与相应抗原特异性结合并借助其它免疫功能将抗原清除掉，起到防病的重要作用。抗体分子由4条肽链组成，有2个功能区构成，即特异性结合抗原的氨基端，称为F(ab＇)段，因抗原不同F(ab＇)段的分子结构不同，又称为可变区（V区）；和担负免疫调节功能的羧基端，称为Fc片段，同种生物的Fc片段是相对保守的，又称为恒定区（C区）。根据恒定区的抗原性不同将抗体分为5个同种型，即IgM、IgG、IgA、IgD和IgE；即使是同一类Ig的分子结构也有不同，据此又可将同类Ig分为不同亚类，如人IgG可分为IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。尽管抗体Fc片段不与抗原发生特异性结合，但在发挥免疫功能方面是不可或缺的。当抗体V区与抗原发生结合后，必须借助C区的作用，在体外可发生各种抗原抗体结合反应，有力于抗原或抗体的检测和功能的判定，在体内可中和毒素、阻断病原入侵、清楚病原微生物等。Fc片段主要功能有：补体激活功能、结合Fc受体功能和穿过胎盘和粘膜功能。抗体通过与Fc受体结合进一步发挥免疫调理功能和抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用（antibody-dependent dell-mediated cytotoxicity, ADCC）,ADCC作用是机体清楚病原体和肿瘤细胞的重要功能之一。人体内的Fc受体分为3钟，广泛的分布于体内各种免疫细胞和体细胞的表面，发挥着重要的免疫调节功能，同时抗体在体内的半衰期起着重要作用。

近年来，随着单克隆抗体技术和基因工程技术的快速发展，涌现出大量的人源化抗体、基因工程抗体和抗原结合的Fc融合蛋白，俗称Fc抗体，（antigen-binding Fcproteins. Fcabs,）。这些抗体的研制成功为各种疑难杂症提供了有力的精确诊断和精准治疗的手段，已有350多种抗体获批应用于临床，每年获得数百亿元的经济效益。特别是出现了大量的针对肿瘤细胞的单克隆抗体或人源化抗体。但是目前临床上所应用的抗肿瘤抗体多为针对肿瘤细胞表面优势抗原的，如CD抗原系列，而非肿瘤细胞特异性抗原，因为目前能证明的肿瘤特异性抗原寥寥无几，这在很大程度上影响了抗体的治疗效果，同时增加了抗体的毒副作用。目前在缺乏肿瘤特异性抗原的前提下，制备的抗肿瘤抗体总是有不足之处。另外目前抗体研制多注重V区的作用，而忽略了C区的功能。已上临床的Fcabs类单抗制品均为抗原阻断型，如用于治疗风湿性关节炎的依那西普（Enbrel）,就是阻断TNF受体而发挥治疗作用，其中的抗体Fc段只起到稳定蛋白和增加半衰期的作用，而没有进一步发挥其免疫调节功能。

众所周知癌症治疗是世界性难题，目前常规的手术、放疗、化疗等方法还不能治愈癌症，寻找更有效的治疗手段一直是国际上重点研究领域之一。所以研发具有治疗作用的新型生物制剂具有重要的社会意义和经济意义。