[发明专利]一种兔精液冷冻保存稀释液及使用方法

说明书

本发明公开了一种兔精液冷冻保存稀释液及使用方法。该兔精液冷冻保存稀释液的每100ml纯化水中包括如下组分：葡萄糖4‑5g，柠檬酸钠0.2‑0.4g，透明质酸1‑3g，超氧化物歧化酶3500‑4000IU，肌醇0.4‑0.6g，新鲜卵黄5‑6ml。其具体使用方法为：(1)将冷冻保存稀释液水浴加热至37℃，然后缓慢倒入兔精液中，边加边轻轻摇晃，使冷冻保存稀释液与兔精液充分混合；(2)稀释后的兔精液用细管分装，置于5℃平衡30～60min；(3)平衡后的兔精液液氮冷冻保存。本发明的冷冻保存稀释液大大提高了冷冻后精子的活率，质膜完整率和顶体完整率，有利于提高兔繁殖效率和育种速度。

技术领域

本发明属于人工授精技术领域，特别是涉及一种兔精液冷冻保存稀释液及使用方法。

背景技术

养兔业投资省、见效快、风险小，是农民脱贫致富的一条好路子，被专家称为“前途光明的新兴产业”和“农村新的经济增长点”。近几年来，随着我国精准扶贫政策的深入贯彻落实和西部大开发战略的实施，广大群众，特别是贫困农户和西部地区农牧民，把养兔业列为首选项目，国家每年投入大量扶贫资金帮助农牧民发展养兔生产，全国各种家兔的饲养量已超过4亿只，年兔毛产量达到8000余吨，年产兔肉超过45万吨，整个养兔产业产值超百亿元。

目前，人工授精技术已经应用到大多数家畜中，在国内，牛、羊、猪等的冷冻精液已经商品化大规模生产，但兔的人工授精技术还没有得到广泛应用，其中一个重要的因素是精液的保存问题。精液的保存可分为常温、低温和冷冻保存，其中常温和低温保存受地域和时间的限制，使兔的品种改良问题得不到根本的解决。精液的冷冻保存可以解决公兔“夏季不育”的现象，也可避免因其它原因造成公兔暂时精液质量不佳的问题。因此，兔精液的冷冻保存对兔的品质改良及大规模商品化生产具有十分重要的意义。

冷冻保护剂是影响兔冻精质量的重要因素。自从人们发现甘油的冷冻保护特性后，迅速促进了家畜冷冻精液的发展。但是，甘油作为一种渗透性冷冻保护剂，能够渗入精子细胞内部，浓缩或结合细胞内水分，降低溶液中盐的浓度和稀释液的渗透压。一方面对精子有保护作用，另一方面又对精子具有一定的毒害作用，部分精子经脱水后冷冻效果较好，但解冻后却无运动力和受精能力。近年来人们致力于研究非渗透性冷冻保护剂，并结合向稀释液中添加其他成分以改善冻后精子质量。对于非渗透性冷冻保护剂，透明质酸引起了研究人员的高度关注，这主要是由于透明质酸能够在生物活性细胞脱水的情况下在细胞膜外面形成一层保护膜，从而在冷冻过程中发挥保护活性细胞的作用。此外，精液在平衡及冷冻处理过程中，易受到自由基的损害，因此，在冷冻稀释液中添加抗氧化剂有利于保护精子。

本发明在传统稀释液的基础上，以冻后精子活率、质膜完整性、顶体完整率等为质量评定指标，探索非渗透性冷冻保护剂透明质酸、抗氧化剂超氧化物歧化酶和肌醇对兔精液冷冻的保护效果，本发明对生产中进一步提高兔冻精质量具有重要的指导作用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种兔精液冷冻保存稀释液及使用方法。本发明能够有效解决兔精液冷冻后精子活率、质膜完整性、顶体完整率低的问题，有利于精液冷冻保存技术在养兔业中的推广，有利于提高兔的繁殖效率和育种速度。

为了达到上述的目的，本发明采取以下技术方案：

一种兔精液冷冻保存稀释液，所述冷冻保存稀释液的每100ml纯化水中包括如下组分：葡萄糖4-5g，柠檬酸钠0.2-0.4g，透明质酸1-3g，超氧化物歧化酶3500-4000IU，肌醇0.4-0.6g，新鲜卵黄5-6ml。

优选的，所述兔精液冷冻保存稀释液通过将葡萄糖、柠檬酸钠、透明质酸、超氧化物歧化酶、肌醇加入纯化水后充分搅拌，混合均匀制得。

优选的，所述冷冻保存稀释液的每100ml纯化水中包括如下组分：葡萄糖4.54g、柠檬酸钠0.38g、透明质酸2g、超氧化物歧化酶4000IU、肌醇0.5g、新鲜卵黄5mL。