[发明专利]Plackett-Burman设计和响应面法联用优化提取羊肚菌多糖的方法

权利要求书

1.一种Plackett-Burman设计和响应面法联用优化提取羊肚菌多糖的方法，其特征在于：利用Minitab17 软件，根据Plackett-Burman 实验设计提取羊肚菌多糖的料液比、酶用量、酶解pH值、酶解时间、酶解温度，超声功率、超声温度，超声时间，在单因素实验的基础上，以羊肚菌多糖得率作为响应值，对料液比、酶用量、酶解时间、酶解pH值、超声时间5个影响因素进行评价，筛选出主效应因子，将主效应因子作为响应面设计的因素，建立响应值与各因素之间的数学模型，依据模型预测羊肚菌多糖的理论得率，然后确定羊肚菌多糖提取的最佳工艺参数，用超声波辅助提取羊肚菌多糖。

2.根据权利要求1所述的一种Plackett-Burman设计和响应面法联用优化提取羊肚菌多糖的方法，其特征在于：具体包括以下步骤：

（1）原料处理：挑选羊肚菌子实体，清洗、干燥粉碎后过80目筛；

（2）单因素实验：控制酶解温度为50℃、超声功率 240 W、超声温度 50 ℃，以羊肚菌多糖得率为响应值，利用Minitab17软件，根据Plackett-Burman 实验设计提取羊肚菌多糖的料液比、酶用量、酶解pH值、酶解时间和超声时间，分别考察料液比为1:10、1:15、1:20、1:25g/mL，酶用量为0.2、0.4、0.6、0.8、1.0%，酶解pH为3.2、3.6、4.0、4.4、4.8，酶解时间为20、40、60、80、100 min，超声时间为10、20、30、40、50 min条件下对羊肚菌多糖提取效果的影响；

（3）Plackett-Burman 实验：在单因素实验的基础上，以羊肚菌多糖得率作为响应值，对5个影响因素进行评价，筛选出主效应因子；

（4）响应面实验设计：依据Plackett-Burman 实验结果，选主效应因子作为响应面设计的因素，建立响应值与各因素之间的数学模型，依据模型预测羊肚菌多糖的理论得率，确定羊肚菌多糖提取的工艺参数；

（5）根据优化的工艺参数条件，采用纤维素酶解与超声波辅助提取羊肚菌多糖。

3.根据权利要求2所述的一种Plackett-Burman设计和响应面法联用优化提取羊肚菌多糖的方法，其特征在于：纤维素酶酶解温度为50℃，过筛后的羊肚菌子实体粉末与蒸馏水按照料液比为1:10-1:25g/ml混合，酶用量为羊肚菌子实体粉末质量的0.2-1.0%，酶解pH值为3.2-4.8，酶解时间为20-100min。

4.根据权利要求2所述的一种Plackett-Burman设计和响应面法联用优化提取羊肚菌多糖的方法，其特征在于：超声波提取的超声波功率为240W，超声温度为50℃，超声时间为10-50min。

5.根据权利要求2所述的一种Plackett-Burman设计和响应面法联用优化提取羊肚菌多糖的方法，其特征在于：超声处理后进行灭酶处理：90℃灭酶30min后4500r/min离心15min，提取上清液，用体积为上清液体积3倍的95%乙醇醇沉过夜，然后4500r/min离心15min，沉淀用蒸馏水复溶，定容至100mL,稀释25倍，测定吸光度，计算羊肚菌多糖得率。

6.根据权利要求2所述的一种Plackett-Burman设计和响应面法联用优化提取羊肚菌多糖的方法，其特征在于：料液比为1∶22g/mL，酶用量为0.8%、酶解pH为4.0、超声时间19min。