[发明专利]粪产碱杆菌的用途、粪产碱杆菌WZ-2及其制备的降解剂和用途

说明书

本发明涉及一株粪产碱杆菌WZ‑2，该降解菌从戊唑醇污染的菜地土壤中分离获得。该菌株已于2018年1月25日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号CGMCC NO.15301。本发明提供的降解菌WZ‑2制成菌悬液后，可以通过直接加入土壤的方式应用于土壤中戊唑醇的降解，能快速的降解土壤中残留的戊唑醇，从而降低戊唑醇对土壤环境的生态压力，起到修复戊唑醇污染土壤，保护生态环境的作用。该菌株的菌剂制备工艺简单，效率高，成本低，无二次污染，具有良好的应用前景。

技术领域

本发明属于生物降解技术领域，涉及粪产碱杆菌的用途、粪产碱杆菌WZ-2及其制备的降解剂和用途。

背景技术

戊唑醇，化学名称为(RS)-1-(4-氯苯基)-4,4-二甲基-3-(1H-1,2,4三唑-1-基甲基)戊-3-醇，分子式C₁₆H₂₂ClN₃O，分子量307.8。其作为一种高效、广谱、内吸性的三唑类杀菌农药，目前已在世界上50多个国家60多种作物上获得登记，广泛用于防治锈病、白粉病、根腐病等作物叶面和真菌土传病害。戊唑醇1995年在中国取得登记，目前已成我国杀菌剂市场主打品种之一。

随着戊唑醇的大量使用，加之具有较长的稳定性，其在不同土壤中的降解半衰期短则十几天长则达几百天，因此有关该农药的残留问题及其危害日益严重。大量研究表明，戊唑醇对哺乳动物非靶标生物均有一定毒性作用，如可以导致斑马鱼胚胎畸形和干扰内分泌效应；对意大利蜂和玉米赤眼蜂具有高风险性，还具有一定的蓄积毒性作用，引起潜在的慢性中毒。除此之外，戊唑醇对土壤微生物多样性及群落结构具有一定的负效应，对土壤生态系统健康具有潜在的毒性效应。因此，消除环境中戊唑醇残留污染已成为科研工作者亟待解决的具有重大经济和社会意义的命题。

利用微生物修复污染土壤因其操作简单、经济适用、环境友好等特点已成为降低土壤中农药残留量的有效措施。迄今，国内外报道多株戊唑醇降解菌，如哈茨木霉菌(Trichoderma harzianum)和荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)、粘质沙雷菌(Serratia marcescens)等。但本发明所筛选的粪产碱杆菌(Alcaligenes faecalis)是首次发现对戊唑醇具有降解能力，这对戊唑醇污染土壤的生物修复以及丰富戊唑醇生物降解微生物资源具有重要的意义

发明内容

本发明的目的在于提供一株降解菌WZ-2用于土壤中杀菌剂百菌清，该降解菌从戊唑醇污染的菜地土壤中分离获得。该菌株已于2018年1月25日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101)，保藏编号CGMCC NO.15301，经鉴定为粪产碱杆菌(Alcaligenes faecalis)。形态特征及生物学特性为格兰氏染色阴性，不产芽孢，菌落光滑粘稠，呈黄色，不透明。接触氧化酶、硝酸盐还原酶呈阳性，甲基红、吲哚、明胶液化、淀粉水解试验均呈阴性，不产生H₂S气体。

以戊唑醇降解菌WZ-2的总DNA为模板，利用细菌16S rDNA通用引物(27F：5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3'，1492R：5'-GGTTACCTTGTTACGA CTT-3')进行PCR扩增，得到约为1.5kb的扩增产物，测序由上海生工生物工程股份有限公司完成，其核苷酸序列如SEQ IDNO 1所示，该序列已上传GenBank(MG 828834)。

根据GenBank序列同源性比较，戊唑醇降解菌WZ-2与粪产碱杆菌(Alcaligenesfaecalis)同处于一个最小的分支，同源性达到100％。结合菌株的生理生化特性，将戊唑醇降解菌WZ-2初步鉴定为产碱菌属粪产碱菌种，命名为戊唑醇降解菌Alcaligenes faecalisWZ-2)。